[問題] 向中研院購買的shRNA

看板Biotech作者 (自由 呼吸 存在)時間18年前 (2007/10/02 12:18), 編輯推噓6(6推 0噓 4→)
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抽向中研院購買的shRNA的plasmid是否有特殊的技巧? 我用Quiegen的mini prep kit抽了好幾次 養小量抽3 c.c菌液最後用30 uL的水去elute 但幾乎出抽不出來...濃度低到只有0.05~0.06 ug/ul 過程十分小心 260/280的比值竟然高到3甚至4 以前抽plasmid從來沒有過這樣的問題 請問有經驗的前輩該如何改進 謝謝回答 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.60.163
推
10/02 13:29, , 1F
寫信去RNAi cortism問!
10/02 13:29, 1F
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10/02 13:45, , 2F
你是用TB養嗎
10/02 13:45, 2F
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10/02 14:00, , 3F
這個shRNA的菌好像都長的特別慢就連塗plate時也是長超小
10/02 14:00, 3F
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10/02 14:03, , 4F
所以養的時間比較久才會抽的比較多 我用LB 5ml 養20小時吧
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我是用LB養 我塗plate的時候長的很小顆但是很多 塗太多嗎?
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10/02 15:17, , 6F
所以養小量要抽到5 c.c 才會有正常的濃度囉...
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10/02 18:29, , 7F
要用TB以300rpm養17-19小時,建議值是3倍稀釋OD600=0.4-0.6
10/02 18:29, 7F
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10/02 18:32, , 8F
我是抽5ml,回溶20ul
10/02 18:32, 8F
推
10/02 22:34, , 9F
如果是low copy的plasmid就會較少量，長度較長可加熱再elut
10/02 22:34, 9F
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文章代碼(AID): #170SQDj7 (Biotech)
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