Re: [求救] 請教無菌操作的問題
※ 引述《Starling (:))》之銘言：
: ※ 引述《gunking (槍王)》之銘言：
: : 請教各位前輩有關微生物實驗的無菌操作，
: : 這些問題看起來似乎都很幼稚，
: : 但在下原本不是學生物領域的，
: : 研究室也剛要投入生物科技領域，
: : 懇請各位撥冗指正下面的問題。
: : 1.物品拿進無菌操作台之前的消毒。
: : 要把滅完菌的東西(拋棄式培養皿、玻璃器皿、玻璃器皿外包著報紙、tip盒...)
: : 要放到無菌操作台之前會接觸空氣，
: : 要不要對這些物品的表面噴酒精消毒後，再放入?
: 當然是噴一下比較保險
: 不過，再這邊我有一個問題
: 那就是，我以前有一個中央的學長習慣是，酒精噴完後，要用擦手紙擦拭過
: 他是這樣說的:如果不擦，妳噴酒精就失去意義了
: 這句話我還是沒有很懂，因為當年在問下去他就要發脾氣了
: 所以不是很趕在菜鳥時期就去讓學長發脾氣
: 當然也想過自己查證，但仍無確切答案
: 剛剛好有板友要討論，順便再請問一下大家的經驗
: 然而
: 另外也有別的學長
: 習慣是噴了酒精，然後拿進去hood中，待其於lamina flow中風乾
: 這位學長的說法就與之前的那位迥異
: 他說:不能去擦唷，妳怎麼知道擦手紙一定乾淨，擦了只會增加污染機會
我猜前者是酒精噴太多了!..以致於拿進去無菌操作台
過火會整個燒起來..所以先把多餘的酒精擦掉..
事實上我比較贊成後者的方式..
然而每次在無菌操作噴酒精時，
要如何才能確認是"徹底滅菌"..這是很難界定的
因此就會有人把酒精噴一堆..慢慢讓他在無菌操作台揮發
性子急一點的就把它擦拭過繼續使用啦!
: : 2.拋棄式培養皿的儲存及使用。
: : a.滅完菌塑膠拋棄式培養皿一買來後，大家都怎麼儲存的?
: culture room中會有專門的空間或櫃位去存放
: : b.儲存時，正放、倒放有沒有關係?
: 應該是擺整齊注意乾淨就好了吧
: : c.是不是袋子一打開，那一包就要用完?
: 這個倒是沒有一定耶 可以續用啊 只是會用一個夾子去封口
: : d.要放到無菌操作台前，要不要對這些物品的表面噴酒精消毒?
: 還是會噴一噴
: : e.要拋棄前，是否整個含培養基一起滅菌?
: 看實驗室以及學校的相關規定吧，有的實驗室好像還可以直接再水槽沖洗的
: 當然啦，那是內涵無感染物質的情況
: : 3.塑膠品的滅菌(autoclave)。
: : a.市售滅菌過的拋棄式塑膠培養皿及滅菌過的tip，
: : 使用前需不需要再滅菌過，以確保裡面無菌?
: dish plate等等 應該買來就是無菌的包裝
: 而tip的話，則是買大包的，然後值日生負責插tip，拿去滅菌
: : b.螺旋蓋試管裡面裝培養基的時候，螺旋塑膠蓋可以一起滅菌嗎?
: 其實，妳說的那些tube 應該不太能受熱耶
: 我們實驗室的tube，plate，dish等等都是買來就無菌包裝，用完就丟
: : c.有哪些塑膠品是不必或不行進行滅菌? 要如何分辨呢?
: 訂貨時，或者目錄，應該都看得到吧，不然打電話訂貨時問一下公司囉
: : 4.玻璃培養皿的滅菌。
: : 玻璃培養皿滅菌時，上下蓋合起來，外包報紙進行滅菌，
: : 這樣高溫蒸氣有孔隙進入培養皿內部滅菌嗎?
: 我們滅器械時，都適用錫箔紙包，包完就拿去aotuclave
: 之後放在UV裡風乾
: 這樣而已耶
滅容器要使溫壓環境能充斥容器內..才有滅菌效果
因此容器都不會緊閉的原因在這
但是滅完要取用又怕直接暴露外界..所以通常是蓋著稍旋而不旋緊瓶蓋
: : 5.agar培養基之滅菌。
: : 看書上寫，agar用flask調好後，需要用棉塞塞住並包鋁箔紙，才能滅菌。
: : 請問可否只包鋁箔紙就去滅菌?
: 沒經驗
這個可以..沒有問題..但是加個棉塞比較OK (鋁箔紙有裂痕就完了)
: : 6.消毒用酒精濃度。
: : 看到書上寫酒精濃度有70%也有75%，
: : 請問大家多用那種濃度呢?
: 其實，以前上微免時驗時，老師曾經說過
: 7X %的酒精，效果最佳囉
: 高到8X % 或者低到 6X%就會打折了
: 所以習慣上都是用75% 當然， 70%也常用
: 應該沒有太大的差別
: : 以上問題是看過幾本微生物實驗書之後，
: : 有幾個轉折性的小步驟未交代(尤其塑膠品部分)，
: : 才向各位前輩請教的。
: : 感謝各位，祝大家中秋快樂。
: 只是經驗
: 不一定都對
: 希望大家幫忙集思廣益
: 因為畢竟每一個人都經歷過菜鳥的時期
: 都曾經希望能有人在自己辛苦摸索時，能給予適時的幫助
: 無關以上內文
: 既然聊起了一些進實驗的基本東西
: 有些話不吐不快，順道提一下
: 我在實驗室發現，很多人都滿"健忘"的
說真的..很多事情習慣之後..原因為什麼就很少人去深究了
只有自己吃過虧有深刻去研究的才會了解這種道理阿
: 等到自己熬過來後，成為實驗室學長姐了，身為熟析環境的"老鳥"
: 到了這一天，竟然將當年，自己曾經是新人時所有的一切艱辛給忘得一乾二淨
: 不願意帶學弟妹
哈哈..這個也沒有您想得這麼誇張啦..
畢竟人有七情六慾
對一個碩班老人..這是他拼畢業的最後機會
有時候遇到個小蘿蔔頭..愛問一堆白目問題..
你想他會怎麼想?
敝人的經驗是會告知新人該做什麼事..原因不見得說..因為
你自己也未必知道..也是前人告訴你的....
對於原po發生的經驗我也有
我反而是藉此自己去找答案..(你盧別人太久人家也會不爽)
到我要畢業時，反而是實驗室其他人有疑問都找我幫忙
甚至畢業一年後還有學弟打電話求助..
這是個給你自己學習的好機會
: 對於剛剛進實驗室的summer，懵懵懂懂的問題都會顯得不耐煩
: 我認為我把這種況狀，看成是"健忘"，還有點美化了這種心態
: 當然不是說，要去慣壞了底下的學生，讓他們失去自己研究的能力
: 但是，畢竟人家初到新環境，對於"什麼藥品，什麼器材放哪邊?"的問題
: 勞煩一下開個金口，應該也不是什麼難事
這個真的太扯了
: 至於實驗怎麼做，能讓學弟妹學的，也不應該好像很怕有人跟著看就會吃虧一樣
: 或者必較惡劣的，對於較有實驗室經驗的學弟妹，才會比較肯理會
: 至於完全從零開始的，就完全被歸類成拖油瓶
這個經驗我也有..
經驗的有無最大的差別就是會不會幹蠢事或危險事..
因此之前我對有無經驗的學弟妹訓練方式就有差..
沒經驗的要先紙上談兵，帶一次實作，讓他自己做看結果OK才放行(還真像帶大學部實驗)
因為手續繁雜，有時候要有充裕的時間才能教
和有經驗的動一動嘴巴就可以不一樣..看起來或許有些落差吧
: 也許很多時候，真的無關新人的程度
: 只是有沒有經歷過而已
: 有些儀器的使用也沒有多難
: 帶人家看一次，人家就會用了
: 不要好像"吝嗇"於自己的所知似的
: 一句:"你什麼都要學長教嗎?"
: 常常會弄得原本滿心期待要好好學習的學弟妹心頭陰影難消
: 實驗室的成長，不應該是在這種小地方去斤斤計較的
: 實驗技術與方法，大家分享，才能知道自己是否有缺失
: 搞不好自以為已經熟析得不得了的實驗
: 其實也只是你這幾年來不斷地重複愚昧的習慣而已
: 教學相長搞不好也能給你自己不少的幫助，挑出一些癥結
: 也不要過度膨脹自己會的東西，那些技術確實是你的學習心血沒錯
: 但，在將來學術上的漫漫長路來看，若你老是覺得這些心得很怕別人學走的話
: 其實你的格局已經被自己限制住了
: 試想，有哪位大學者是靠"暗慷"來贏別人的啊?
: 況且，還是那句老話，將心比心，沒有人生下來就會每一項實驗的
: 就算你曾經因此而吃過苦，也不要覺得一代一代都要經歷這種鳥事，才算常態
上面提的我完全同意..也因此我之前帶別人作實驗有時都會藉由討論
來修改實驗流程中的細節..因為這些沒有"一定不變"的
: 離題了，只是有感而發
: 抱歉
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