Re: [問題] 想問大家induction時所選擇的OD600值
※ 引述《mournermind (阿矇)》之銘言：
: 我們實驗室長久以來的方法大概就是
: 1. single colony -> 養12hr以上 OD600約1.XX
: 2. 以約1/10的菌液加入新鮮LB中 OD600約0.1 進行refresh
: 3. 約2~3hr後 OD600 約0.5進行IPTG induce
: 4. 取定點時間induced的菌看蛋白表現
: 可是我在pET mannual中所看到的方法大概是
: 1. single colony -> 養到 OD600約 0.5
: 2. 以3ml的菌液加入100ml新鮮LB中進行refresh
: 3. 約2~3hr後 OD600 約0.5 ~ 1 進行IPTG induce
: 4. 取定點時間induced的菌看蛋白表現
如果是我，一開始我會先試這個。你們實驗室的方法你可以有問題之後再試。
（或是通通試亦可。那就一次養兩瓶，一次搞定）
: 以上我沒誤解應該是這樣
: 另外
: 我問其他家專門做蛋白的同學他跟我說
: 她們家老闆跟她們說菌液refresh後大概OD600要到0.8
: (反正就是快進入station phase)
個人的經驗亦是如此。
我的菌株在saturation state之後再轉1L LB亦表現良好…
不過我也想說，應該有可能是case by case.
: 時讓菌達到快最大量時再進行IPTG induce會得到較多的產物
: 我現在有點迷糊掉了 不知道板上的其他學長姐所表現蛋白的條件會是怎樣??
: 另外因為我現在表現的蛋白是大部份不可溶但supernatent也表現出有產物的情況
: (SDS PAGE就可看出 不是很濃但比其他雜band強3倍以上)
依據你提供的資料，OD600nm=~ 1.0 will be better than 0.5.
不放心的話，用20mL or 50mL小量養，測試OD條件，以SDS-PAGE驗證。
: 我現在已經進行25度C的養菌 可是養了22hr了LB還是很澄清ˊˋ 這樣正常嗎
: (我的菌 lacI represser很像鎖不太緊即使不加IPTG也會表現
: 我在37度C養的這隻要表現的菌也會比一般的菌長的慢點)
: 另外在進行低溫誘導時是否也是要在菌OD600到一定值後才加IPTG?
usually.太早會導致菌很快樂，但沒有妳要的蛋白表現。
不過…在這邊看似忽妳的菌體質不太好。
如果實驗室有學長姊的話，拿他們的菌試試？（competent cell）
: 還是一開始就可以加了??(不好意思問這種問題 因為實驗室學長姐要我自己
: try try看ˊˋ 可是我想問有經驗的比較快... ...)
: 以上謝謝各位學長姐啦~
參考看看
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推
09/14 17:00, , 1F
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