[問題] 如何去除使用urea去作蛋白的deaggregation
餓死抬頭
想請教眾高手們
小弟使用E.coli生產突變用蛋白
突變蛋白上接了一段CBP-Taq
純化後去鹽濃縮並以水回溶
但總是會有些沉澱
我認為那是蛋白的aggregation
所以打算使用飽和urea (100ul) 單獨對沉澱物去做deaggregation
但是做完之後我想要使用SDS-PAGE確認蛋白
不過由於飽和SDS-PAGE濃度過高
跑膠會糊成一條.....
因此我該如何去除urea
讓我能使用SDS-PAGE確認蛋白呢?
(我有嘗試使用TCA沉澱，不過不知是處理不當還是如何?結果都差不多)
此外
若成功的以urea去deaggregation
我又該如何除去飽和的urea呢?
因為我必須將deaggregation後的蛋白加回原始的清澈液中
使用EK酵素切斷CBP-Tag
感謝各位大大的幫忙>"<
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耶 (十字架)▕ 實┌───────┐(講台上) 耶穌問正在seminar的我
蘇 ● ▕ 驗│ ︿囧︿ │ 耶穌：小鬼，你混哪的？怎麼
的 ▔耶▔ ▕ 室│ 我 │ 比我被釘的還慘....？
信 ∥ ╭──╮▕ 的└── ╱╲ ──┘╭──╮ 我 ：主啊，我是研究所新生
徒 ╭│偉大│▕ 人 ╔═══╗╭─│去死│
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