※ 引述《Koilocytosis.bbs@ptt.cc (Koilocytosis)》之銘言：
: 實驗方法
: 3x10^6個細胞以200uM, 500uM, 1mM H2O2處理六小時
: (paper上說可誘發凋亡, 也可見到DNA ladder)
: 用TRI reagent抽DNA (方法:http://www.mrcgene.com/tri.htm).
: 最後加入20uL水將DNA回溶,
: 但因前一步驟的酒精沒有揮發的很完全, 所以總溶液體積約為40-60uL
: 取一半(30uL)樣品, 加上dye混合之後就跑1.2%瓊脂電泳
: 實驗結果
: 之前用這方法抽DNA所測出OD約為1.4-1.7
: 在1200bp上方(也就是分子量>1200bp)有兩條band, 下方則是很淡smear的樣子.
: 我的問題
: 我想請問版上是否有高手用過TRI reagent抽DNA, 並觀察其DNA ladder情形呢?
: 我不曉得是DNA沒抽成功呢? 還是每個well放的量太少, 所以看不到ladder的樣子呢
: 麻煩請版上高手為我解惑呀!! 感激不盡! ^^*
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1.經驗上跟cell type有很大的關係..有些cell跑出來的pattern很容易是smear-like,
不過這在發表時是可以被接受的.
2.你有測純度..那應該也同時有測濃度吧..所以你的loading量是多少呢??
or more information about your running condition..?
3.H2O2的保存是老問題..它常常因保存不好而不work..有確定H2O2是ok的嗎??
or 能造成DNA ladder的試劑很多,是否可能用其他reagent來induce?
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