Re: [問題] 我的WESTERN膠出現問題了~&蛋白保存
※ 引述《tirecake.bbs@ptt.cc (三跪九扣三跪九叩)》之銘言：
> 大家好
> 最近我在做Western時
> 常常配的gel都不會凝
> 有的時候要放一個多小時
> 有的放o/n都不行
> 我有很小心注意我的配方
> 都沒有漏加什麼東西
> 但就是時凝時不凝
> 跟mix的力道有關係嗎
> 會因為votex太猛烈造成不凝嗎?
> 配10mL膠時 我的10%APS 和 TEMED 各加了0.1mL & 0.01mL
> 架膠玻片我也洗過再用酒精噴過擦乾
> 還有~配膠時Acrylamide剛從冰箱拿出就可以用 還是要回室溫?
> 因為同實驗室也有人用同一套藥品配 都沒問題
> 我做western做了一兩百片了 最近就常常鬼擋牆
> 實在找不到原因
> 有什麼我沒注意到的嗎
膠不凝 第一個直覺是 APS
不過實際上可能要看不同實驗室的習慣
比方說我以前呆的實驗室 鑄膠的藥品都是公用的
但是 APS 是配好分裝成小管冰起來
要用的人從公用區拿一管 用過一次以後就自己保管
碰到不凝的時候 第一個猜想就是自己的 APS 掛掉了
當然 如果最近新配了什麼藥品然後大家的膠都不凝 那就要懷疑是別的東西掛了
> 還有
> 我是在sample都快準備好才發現膠凝的很差
> 上面凝了但下緣化掉成凹凸不平
猜測是鑄膠的各種成分混合不均
> 請問加了水和 sample buffer 未煮過的蛋白
> 可以留著隔天用嗎
> 可以放多久
> 放四度冰箱還是負20??
> 非常感謝!!
除非是特別不穩定的蛋白質 一般來說放負二十就可以保存很久很久
western sample 的保存 個人認為沒有任何道理放 4C
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莫非定律:
到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上
補充定律:
拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考
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※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: adsl-76-241-77-15.dsl.bcvloh.sbcglobal.net
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