[問題] 我的WESTERN膠出現問題了~&蛋白保存

看板Biotech作者 (三跪九扣三跪九叩)時間18年前 (2007/08/13 10:03), 編輯推噓6(6推 0噓 2→)
留言8則, 6人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
大家好 最近我在做Western時 常常配的gel都不會凝 有的時候要放一個多小時 有的放o/n都不行 我有很小心注意我的配方 都沒有漏加什麼東西 但就是時凝時不凝 跟mix的力道有關係嗎 會因為votex太猛烈造成不凝嗎? 配10mL膠時 我的10%APS 和 TEMED 各加了0.1mL & 0.01mL 架膠玻片我也洗過再用酒精噴過擦乾 還有~配膠時Acrylamide剛從冰箱拿出就可以用 還是要回室溫? 因為同實驗室也有人用同一套藥品配 都沒問題 我做western做了一兩百片了 最近就常常鬼擋牆 實在找不到原因 有什麼我沒注意到的嗎 還有 我是在sample都快準備好才發現膠凝的很差 上面凝了但下緣化掉成凹凸不平 請問加了水和sample buffer 未煮過的蛋白 可以留著隔天用嗎 可以放多久 放四度冰箱還是負20?? 非常感謝!! -- Digest those memories of him from my heart with trypsin, and store in LN2 bottle forever. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.64.247.100
推
08/13 10:23, , 1F
可能是APS有問題...
08/13 10:23, 1F
推
08/13 15:56, , 2F
同上,APS問題很大. 請新鮮製備吧! 另外,sample buffer+st
08/13 15:56, 2F
→
08/13 15:59, , 3F
sample buferr加了之後就直接denature吧.會安心的多^^
08/13 15:59, 3F
推
08/14 09:54, , 4F
感謝~我的APS都是現秤現配~懷疑是powder四年用不完變質了
08/14 09:54, 4F
推
08/14 22:56, , 5F
我實驗室的AP粉末水解嚴重 =>膠不凝 ==.==
08/14 22:56, 5F
推
08/16 13:25, , 6F
我們把APS放進防潮箱,配完之後過濾滅菌分裝冰在-20,可以撐
08/16 13:25, 6F
→
08/16 13:26, , 7F
很久
08/16 13:26, 7F
推
05/08 01:41, , 8F
我也都配好放-20
05/08 01:41, 8F
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文章代碼(AID): #16lxl_NJ (Biotech)
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