Re: [問題] 關於northern的問題
嗯 對~gel是用formamide做的
我EtBr是等到transfer完,把壓的扁扁的膠拿去外染
是有看到一些尚未transfer過去的sample
但應該佔當初loading sample的極少量
而我拿membrane去UV box
以254nm的UV去crosslink 5分鐘
從box上方的玻璃可看進去我的membrane
是可以看到membrane上有黑黑的
所以想再請問一下 這樣是否就是我的sample有上去呢?
謝謝囉!
※ 引述《leftt (left)》之銘言：
: 我以前用過molecular cloning的古典法做過
: 你用哪種gel跑? formamide嗎?
: 跑電泳的時候有加上一點點EtBr吧
: 一個偷吃步
: transfer完偷偷在紫外燈上看一下就知道膜上有沒有東西了
: 不然唷 照一下你transfer後扁扁的gel渣
: 看看有沒有很多殘留 也可以知道
: Southern也可以用這招測試
: 如果為謹慎連EtBr都沒加的
: 可以把gel渣在拿去外染EtBr也可以知道
: 因為這樣就可以看出來
: 所以我從來沒有染過膜 後面的問題就無從回答起了
: ※ 引述《kirby0415 ()》之銘言：
: : 因為我們實驗室做northern並不是用kit去做
: : 而是用自己配的buffer 還有實驗方法
: : 我現在遇到了一個問題
: : 就是我想去看我transfer以及crosslink後
: : RNA到底有沒有確實crosslink到nylon membrane上
: : 在網路上有查了資料
: : 好像可以用methylene blue去染membrane
: : 這樣可以知道membrane上是否有RNA
: : 想請問有做過這樣染色的人
: : 此方式是否真的可行?
: : 那....crystal violet可以取代methylene blue嗎?
: : 因為這兩個染劑 其實大多都是在染細胞細菌的吧?
: : 用在northern的這個檢驗步驟 好像蠻少人試過的
: : 請知道的版友可以解惑一下囉 謝謝~
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