Re: [問題] 請問有人用G418篩選MCF7細胞嗎
※ 引述《humwang (gogowang)》之銘言：
: ※ 引述《aett (一個人旅行...)》之銘言：
: : 不知道板上有沒有大大用G418做MCF7 的stable clone?
: : 因為我們實驗室在篩選的時候
: : 當G418的藥加入 就會大片死亡
: : 之後三周篩選出來的細胞並不會因為去掉G418而正常生長增生
: : 情況跟我在網路上找到一個人實驗的情形是差不多的
: : http://www.bio.net/bionet/mm/cellbiol/1995-September/002800.html
: : 可是這問題並沒有人有回應
: : 另外一方面我在pubmed上面搜尋有關這方面的資訊
: : 也只有少數三四篇有做到
: : 可是似乎又沒討論到這些問題
: : 真是苦惱呀>"<~
: 有沒有先試試看不要transfect直接先用不同濃度的G418先殺殺看?
: 原則上以能在5天至一星期能將90-95%以上細胞殺掉的dose為佳
: 太低的話會有未被transfected的cells survive下來
: 太高的話, 細胞來不及表現相關的protein就被宰掉了
: 還有每個廠牌買到的G418的effect dose不盡相同
: 這也要注意一下
對啊！一定要先做 killing curve 喔!
如果不是藥加太多 (一般來說會有一個 range，稍微多一點也不致於會死光光)
那就要回頭考慮是 transfection efficiency 的問題
或者是你目前使用的 transfection method 對 MCF7 並不適合
先做看看 GFP 也是可以，不過個人的經驗是 GFP 好的，未必我的 plasmid 就很好
相反的，GFP 只有 1% 發螢光的，我的 plasmid 並沒有那麼差
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