Re: [求救] Polyacrylamide/7M urea gel 超黏拔不起來呀
※ 引述《abelee.bbs@ptt.cc (盒裝鳥人)》之銘言：
> 因為要分離siRNA(20~23nt),所以配置了15%polyacrylamide gel/7M Urea ,
> 配方如下:
> http://www.genetics.ucla.edu/labs/fan/Protocols_MicroRNA.htm
> 40% Acrylamide 18.75 mL
> 5x TBE Buffer 5 mL
> dH20 10 mL
> Urea 21 g
> 10% APS 400 ul
> TEMED 40 ul total體積50ml
> ps: Acrylamide我並沒有加bis-acrylamide
> 鑄完後1個小時左右,我去沒去跑膠,先拆膠起來看看gel是否有問題
> 拔玻璃片的時候就不是很好拔了,但用buffer濕潤後就可以順利的把玻璃片拔開,
> 但是gel卻整個都緊緊黏在白色的板上,感覺gel是有凝固,
> 但是....就是無法把他由白色的板上取出.gel是呈現一種很黏很黏的狀態,
> 用tip去戳它還會牽起絲來.... (￣□￣|||)a
> 我查了幾篇配製gel的文章,
> 有些Acrylamide會寫要加19:1的bis-acrylamide進去,但有些就不會特別著名要加.
> 而Urea從6M~8M的都有,至於10% APS與TEMED的量則各有個的喜好.
> 我算了一下這次用的配方,其實並沒有超出固定範圍內.
> 可以請教一下有配製過高濃度denaturing polyacrylamide-urea gels的先進們,
> 我的配方有錯誤的地方嗎?或者鑄這種gel最佳的配方大家都用多少比率呢?
> 先行感謝大家撥亢回答呀
沒有加bis你得到的是線狀的polyacrylamide
所以會呈現黏稠狀
bis一定要加
加的比例越高
孔洞越小
越適合跑小分子
--
※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: 61-59-139-151.adsl.static.seed.net.tw
討論串 (同標題文章)