Re: [求救] 重組蛋白純化後,分子量改變了
※ 引述《hhyhuang (hhyhuang)》之銘言：
: 最近遇到一個問題,想請教大家:
: 我表現一個24kDa的protein於Ecoli(BL21DE3)
: ,跑PAGE與control比較後,的確可以在約24kDa的位置,
: 看到明顯的band被誘導出來,但是,
: 進行His純化後,結果原本受IPTG誘導的重組protein
: 已經不在24kDa的位置了,跑到37kDa
: 但是,我用抗體又能hybid到37kDa的band,
: 我懷疑會不會我的protein被磷酸化了,有方法可以讓我的protein回復成
: 24kDa嗎?或者有方法證明我的重組蛋白在37kDa是因為被磷酸化所造成的嗎?
: 感激不盡~~
~~~~~謝謝大家的回文~~~~~~~
我的protein是會與膜蛋白(small GTP binding protein)進行交互作用的protein.
如果是其他的作用(如醣化..等PTM),又該做哪些實驗證明呢?(越來越感到慌恐了!!)
另外,在sample dye中含有DTT,這樣可以算是DTT對sample處理嗎?如果算的話,
是不是就不是與dimer有關了呢??
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