Re: [問題] live cell image??
※ 引述《cytospin (My Ernest)》之銘言：
: 各位先進好
: 小妹最近開始想做confocal
: 得到的資訊大多是fix細胞的步驟
: 可是我想要做那種看到protein internalization然後被derade掉的
: 所以要做活細胞影像
: 不過有幾個問題 想問一下有做過的人
: 我的細胞是suspension cell
: 我想看的是cKit (RTK) mutant 他會自動林酸化然後turn over
: 加藥物之後 cKit會不穩定然後 cKit expression就消失了(on western)
: 想請問一下 1. 活細胞影像的fix 還有打洞 使用的Material ??
: 如果是fix的細胞 是4% paraformadehye + 0.5% Triton X100
: 活細胞要用啥ㄌㄟ ?? 又不會弄死細胞又可以intracellular stain的
: 2. 如果我有抗體bind cKit -->會不會影響他internalization??
: 我不清楚我的抗體會部會block cKit function yet...
: 先這樣..感恩....請各位先進給點意見
living cell一定要長在dish 或 plate裡，
所以只能用倒立顯微鏡看，所以除非你們的confocal是倒立顯微鏡。
而你若要看細胞內的整個過程，還要在搭配上time-lapse的相關設備。
至於你的實驗，可能可以在不同的時間點固定細胞，
再去用confocal仔細觀察。
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◆ From: 59.104.151.68
推
05/24 23:59, , 1F
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