Re: [求救] 請問ER stress的測量方式
我想問的問題跟上一篇ER的問題有點像
這是我之前問大家ER stress的問題
後來我使用測GRP78（bip)的方式
加我的刺激劑 測時間點
一開始我直接用lysis buffer下去收細胞
離心之後取cytosolic fraction
前兩次看起來好像有反應 但是後面又做了幾次都做不出來
之後我參考一些paper
大家好像都收whole cell lysate
我第一次用PBS把細胞刮下來 sonication之後直接跑
結果看不太到GRP78的表現
我們老師就叫我改用lysis buffer收 sonication之後直接跑
結果跑出來非常一致 看不出時間變化 =.=
我想請問我應該要怎麼收才對
因為細胞受到stess之後 GRP78應該是由ER的膜上跑出來才對吧？
我的想法是
先把細胞脹破 保持胞器的完整性 離心把細胞膜和胞器離下來 收集cytosol fraction
再用強一點的lysis buffer加下去 然後sonication把ER上的protein通通lysis出來
最後比較cytosal和最後膜上的GRP78表現
如果ER受到stress
cytosal的GRP78應該會增加 而ER膜上的量會減少
（（ 不知道會不會寫得太複雜=.= ））
如果是這樣收的話對嗎？
謝謝大家喔^^
p.s 上次有回應到我信箱的那位大大 可以請你再回一次給我嗎
因為我不小心把信通通刪了 所以問不到你啦 >"< 感恩^^
※ 引述《liuse (充實自己，提昇自己)》之銘言：
: ※ 引述《aljkpyy (hihi)》之銘言：
: : 印象中好像可藉由測某些ER stress時才會產生的分子
: : 也就是偵測跟ER stress有關的marker
: : 不過名稱我忘了~ 你可以查一下~
: 有幾個
: 一個是eIF2alpha的phosphorylation level
: 一個是PERK的phosphorylation level
: 一個是染Bip
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.31
※ 編輯: wuwawei 來自: 203.71.94.31 (05/23 19:05)
推
05/24 00:44, , 1F
05/24 00:44, 1F
推
05/24 11:49, , 2F
05/24 11:49, 2F
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 4 之 5 篇)：