[問題] pcr及電泳的問題.......

看板Biotech作者 (問個問題)時間19年前 (2007/05/11 15:50), 編輯推噓5(501)
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一、我做的基因是人類的drd2、TPH、5-HT2C、ADRA2A、serotonin transporter等基因, 想請問一下各位高手,有沒有那個資料庫能查詢這些基因的電泳圖的呢?除了找paper這個 方法之外,有無這種電泳資料庫及基因頻率資料庫呢?對了,我做的基因都是人家做過的 。 二、PCR完再跑電泳的結果老是很弱,甚至比primer dimer還弱,請問我能怎麼改進呢?降 低annealing溫度(可是已經降到50度了耶)、換dna(因為dna老舊嗎?)、稀釋dna?或 是減少DNTP的量(因為會搶鎂離子嗎?)?這些我都還沒試過,還有其他方法嗎,這些方 法的測試優先次序為何?補充說明我的DNA是口腔棉棒萃取出來的。 三、老師跟我說pcr產物要很亮很強才能做RFLP,請問這是真的嗎?是不是切出來之片段 還會更弱所以看不到呢?還是說產物不夠亮有變通方法呢? 四、爬文發現有些試劑重複凍、融會嚴重影響實驗結果,所以應分裝,所以DNA要分裝,那 dntp、buffer也會有這麼嚴重的影響嗎?還是說上述兩者較不易壞? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ※ 編輯: dnab 來自: 203.71.2.194 (05/11 16:11)

05/11 20:20, , 1F
是提高annealing溫度...
05/11 20:20, 1F

05/11 23:00, , 2F
降primer的量,加DMSO,或產物純化後稀釋再跑一次PCR
05/11 23:00, 2F

05/31 12:24, , 3F
你的primer是不是自己黏得很厲害
05/31 12:24, 3F

05/31 12:27, , 4F
檢體重複冷凍解凍會壞掉,試劑也一樣,最好都分裝
05/31 12:27, 4F

05/31 12:32, , 5F
buffer不用冰 你可以跑一片膠確認DNA的 quality
05/31 12:32, 5F

05/31 12:34, , 6F
做RFLP時 你load gel時可以load多一點
05/31 12:34, 6F
文章代碼(AID): #16H20-eZ (Biotech)
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