[求救] 純化蛋白
我將GST fusion的蛋白用GST column純化後(粗估2mg以上)
用amicon濃縮 再去過anion exchange column
結果發現蛋白在flow through就掉下來了
我查了sequence的pI 是6.8多
而我的buffer pH 是7.4
(Tris-HCl 20mM, NP-40 0.1% and Tris-HCl 20mM, NaCl 1M, NP-40 0.1%
兩種buffer 去拉梯度過DEAE column)
理論上我的蛋白應該會bind上去可是不知為何沒有上....-__-#
anyway為了救回蛋白我只好將flow through的solvent大約120ml
(裡面應該只有洗column + 平衡column的溶液Tris 20mM 跟 NP-40 0.1%)
再用amicon濃縮(浩大的工程阿)
但是濃縮完了以後(~600ul)我發現濃下來的東西怪怪的
有點像aggregate 的樣子 又有點像是膠狀物
拿它去跑SDS-PAGE又更怪了
(有拿沒過column前的去做比較, 沒過的正常singel band帶一點雜band)
跑的band完全糊掉 但是沒有拖band, 形狀像是鋸齒狀(marker 正常)
CCB stain的顏色也怪怪的(青色!? 不會形容) destain 一陣子就掉了
不知板上哪位大德知道我濃縮的蛋白出了什麼事 還有沒有得救!!!?
不然不知道要怎麼跟PI交代囉...........
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求救
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