Re: [問題] 請問IP的抗體
※ 引述《mikis1107 (mikis1107)》之銘言：
: 請問IP實驗中
: 先用Rabbit的抗體將目標蛋白質抓下來後
: 想要看他的磷酸化反應
: 那此時用的WB anti-phophoXX的抗體
: 是不是要用非rabbit的抗體呢?
: 還是兩種一樣是rabbit也可以呢?
要用不一樣比較好
因為加二抗時認的是一抗的 Fc
如果連 IP 也有一樣的 Fc
那會有辨認錯誤的狀況發生
結果會變成有磷酸化和無磷酸化訊號差別不大
(Fc:Antibody 的尾端)
另一種狀況是有跑 SDS-PAGE
此時的 IP 用的 Antibody 的 heavy chain (就是有 Fc 的那一端)
會大約在 50kD 左右的位子
所以你的目標蛋白質不在這個範圍就可以用同樣的
為什麼呢
因為當你用二抗時 50kD 這個位子也會被辨認到(IP 和 WB 1抗 同為 Rabbit 時)
如果你的目標蛋白質剛好在這附近
就會被他"強大"的訊號遮蔽
我表達的不是很好
希望你看的懂
P.S. 我們實驗室也用過一樣的 結果我們的目標蛋白質也在 50kD 附近
就發現了這個問題
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