Re: [問題] 突發奇想細菌作的recombinant GFP會亮嗎?
※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之銘言：
: 請教各位先進
: 如果我把EGFP放進BL21
: IPTG induction後
: 可以純化出一管會發螢光的蛋白質嗎？
: 一時好奇......有人試過嗎？謝謝？
(個人沒有試過 不過 覺得這是一個很有趣的問題 可以當成思考練習:p)
可以先試想
eGFP是怎樣的一個蛋白:
他與原始自然界水母的GFP有什麼不一樣呢?
分子量非常大嗎?
具有複雜的修飾 或是需要別的蛋白來幫它摺疊成正確的形狀嗎?
還是 需要經過別的酵素加工切成成熟的模樣呢?
如果查不到資料呢 那換個角度想好了
eGFP可以做什麼研究?
很常見的用法之一 便是把他接在我們要看的蛋白上
可以不用經過繁瑣的免疫螢光染色法 只要直接把表現細胞拿到螢光顯微鏡下一看
有綠沒綠 有沒有表現 一看就知道
還可以用Sorting的技術 來把表現量高的細胞挑出來 或是用Flow來定量
這是做蛋白質功能性研究很方便的一個工具
(就像是在滿滿的不好笑joke海裡 可以輕鬆的靠m標記 來找出真正的笑點)
所以 eGFP不應該是一個很難做又很大的蛋白
不然 被我們強迫接上的目標蛋白 不就變成像是拖了鉛球的囚犯 無法發會正常的功能了!!
囉哩囉唆嘴砲了這麼多
其實 eGFP能不能在細菌上表現 我們應該可以得到一個可靠的假設了
接下來 就是實驗驗證啦
那嚜 根據別人的實驗結果 發現 運氣很好的和我們的假設相符
細菌真的可以做出會亮的eGFP protein
(原來的寫法 好像不能表達真正想說的 修改了一下
實驗中或是讀paper的時候 常常會有很多的突發奇想
可以試著在查前人有沒有動手驗證過我的奇想前 先推論一下實驗該如何做 或是
應該的結果
可以得到很多樂趣的~而且應該對於論文討論的寫作幫助很大:p)
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雖然生物學的實驗總是 總是 充滿了 例外 意外 不知道為什麼和假設就是相反
不過 如果在每次提出問題 動手做之前
都能先想清楚原因推論 或許可以少走很多冤枉路^^
(這是以前聽一個老師說的:p)
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