Re: [問題] 抽取RNA相關問題
※ 引述《lucidol (台北-淡水)》之銘言：
: 各位前被大大您們好
: 之前實驗室都是專門做關於E. coli與yeastDNA以及蛋白質表現方面.
: 但是突然老師要我做抽取RNA來做PCR
: 目前面臨問題是.因為實驗室裡學長姊沒做過RNA相關實驗.
: 老師也不是很清楚.問東問西找資料然後叫我找資料跟他討論
: 討論之後老師他本人解釋很怪很疑惑也很不確定.所以想請問有過RNA的前輩解惑
: 我想問的問題是:
: 1.實驗室沒專門做RNA的實驗桌及儀器(ex.離心機).老師跟我說用水擦一擦再用70 %ETOH
: 清理過就可以操作RNA實驗.這樣的做法可行與否?
我也是抽yeast的RNA
抽的時候戴口罩和手套
盡量少講話和摸來摸去的
實驗桌和儀器我們也沒有分開
用的時候把桌子整理乾淨
可以貼一張乾淨的防污紙
或是用70％酒精擦一下
: 2.關於Tip,實驗室沒有新的tip盒,只有舊的.老師叫我把他一樣用水跟酒精交互清洗.
: 就可以插tip去滅菌.贓贓的tip盒用這樣處理方式可以把RNase除去嗎?(實驗室的Tip
: 是沒有棉花濾膜那一種)
建議你用乾淨一點的tip盒
舊的也沒辦法 但是盡量乾淨囉
插tip的時候用火焰消毒過的鑷子插
不要碰到tip尖端
然後滅菌至少40分鐘
: 3.關於pipette,老師也是叫我用水跟酒精交互擦拭做初步清潔,但我是想問用很久的
: pipette內部空腔不是都贓贓的容易污染?要怎麼清理內部減少RNase污染?用棉花
: 棒清在直接高壓高溫滅菌?
基本上pipette內部應該一年校正的時候會幫你做內部清潔
所以如果操作沒有問題的話還好啦
用酒精擦拭一下不太會有污染的問題
: 4.操作過程中所使用的藥品,是不是都需要在RNase-Free場所配置?配置藥品所需用到水
: 應該是拿DEPC-ddw吧?老師是跟我說像是phenol/chloroform拿抽DNA的那個來用就可以,
: 這樣ok嗎?我很質疑他說的這一句
配置的過程是不需要在RNase-free的場所配
但所有需要用的水通常都是DEPC水
有些可以配完再加DEPC處理再滅菌
另外
我們實驗室是用TRIZOL抽RNA
如果你是用phenol-chloroform的話
phenol的pH值和DNA用的不一樣喔
chloroform的話是一樣的
: 5.老師叫我用bead及acid phenol來做RNA extraction,那bead要怎麼處理去污染阿?
: 用來裝的eppendorf要怎麼做預處理去除RNase?是直接滅菌??
我們實驗室的beads有分兩種
大(3mm)的是用清潔劑洗乾淨後泡0.2N NaOH 20'
然後再用一次水洗淨 二次水潤洗 烘乾之後滅菌
小(0.2mm)的是買處理好的
所以直接滅菌就好
至於eppendorf和tip就是用全新未開封的
裝的容器盡量也是新的乾淨的
如果你怕的話
你也可以先用NaOH處理過
但要記得NaOH一定要洗乾淨
其他所有在RNA實驗要用到的東西
比如說電泳槽之類的
也要先用NaOH處理過喔
也可以用3%雙氧水處理10'
: 6.實驗過程中可能會碰到冰箱跟離心機,我戴手套然後再碰這兩個器材會不會因為其
: 他人沒戴手套就這樣把RNase附著到手套上面進而污染我的東西?(實驗室沒專門用
: RNA的冰箱,離心機以及場所)
你可以換手套
換下來的手套可以留著給DNA實驗用
這樣也不會太浪費
: 目前我只想到一些疑問,請各位前輩不令指教 謝謝
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