[問題] confocal樣本處理
我染PI出現兩個問題,
麻煩請幫我看圖中紅色的部分, 謝謝 ^^
這是以前染的fibroblast, 是成功的 http://tinyurl.com/y9jpnb
問題一 相同種類細胞, 但是染到細胞質, 且核部分不明顯 http://tinyurl.com/ygtgfb
問題二 不同種細胞(keratinocyte), 為什麼核中有圓圓區域染不到
keratinocyte A: http://tinyurl.com/yc6g5g
keratinocyte B: http://tinyurl.com/ycdpt8
是因為不同種類細胞而有的特徵嗎?
可是我實在想不出來那應該是細胞核的哪一個細部位置? 有些人說是核仁,
但核仁的顏色應該要比較深(紅), 不是嗎?
我處理步驟都一樣(每個步驟之間都用PBS wash三次):
1. 細胞固定: 2% paraformaldehyde, 15min, RT
2. 打 洞: 0.1% triton X-100, 10min, RT
3. blocking: 1% FBS in PBS 1-2hr, RT
4. 染 一 抗: 這部分沒有問題, 暫不討論
5. 染 二 抗: 同上
6. 染 核 PI: 4ug/mL, 5min, RT
7. 封 片
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