Re: [問題] DNA定序之後的問題
會產生問題的地方太多了
你把基因弄出來後已經PCR一次
clone完後定序時又PCR一次~~
每次PCR中其實又複製了好多次
當然這都是我們沒辦法控制的
先不管這個
要增加準確度我們可以控制的在於
1. 序列多讀幾次，起碼從頭和尾各一次，當然這還是不夠
2. 送序的序列最好為基因的全長序列
3. 從不同的strain中clone這個基因送序
大概是這樣
※ 引述《lovepig414 (pig)》之銘言：
: 各位大大
: 小弟以本實驗室的細胞株做了RT-PCR後，之後再做clone完後，送生技公司做定序，
: 定序完成後，上了NCBI做序列比對，發現自己做的定序和資料庫上的定序相似
: 度高達98%，我想應該是很高吧，所以推測此細胞應該是有此基因，然而，我的
: 老闆卻問我了一個問題，就是為什麼相似度不是100%?要我做回覆！
: 我自己想的結論是：
: 1.也許是機器的問題，本身就有錯誤率！(但是機器做出錯誤的
: 機率是很低的！)
: 2.也許是基因上本身就有一點不一樣，但是轉譯出的protein
: ，可能會是相同的！(這個可以做胺基酸比對得知。)
: 再來我就不太知道為什麼了，自己也上網站找尋了一下，但是真的找不太到相
: 關的資料，不知道板上的大大們，有沒有人可以幫幫我啊！再過幾天就要meeting，
: 可是我卻如此的不知所以然，救救我吧！ 感恩阿！
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