Re: [問題]關於抽質體DNA的問題

看板Biology作者KLAHA (Scars of sabbath)時間20年前 (2004/02/17 20:23)推噓9(9推 0噓 0→)

留言9則, 7人參與討論串1/3 (看更多)

※ 引述《citrinin (anticitrinin)》之銘言： : ※ 引述《wwwjjj (......)》之銘言： : : 在下是剛進實驗室的新手 : : 目前還是大學生 : : 想請問各位大大 : : 抽plasmid DNA的步驟中 : : 在加入各種buffor,靜置.......... : : 之後有一個步驟:離心後取澄清液 : : 上面的解釋說此澄清液含有plasmid DNA : : 而沉澱物則包含了genomic DNA, proteins, cell debris, SDS ... : : 我想請問的是genomic DNA不是細菌除了plasmid外的DNA : : 兩者同樣是DNA只是大小.形狀的不同 : : 為什麼plasmid DNA會溶解而genomic DNA卻會沉澱下來 : : 不知道這樣形容會不會很模糊 : : thank you:))) : 一個牛津大學的博士告訴我是被 protein 給'絞'進去的聽你說法應該是用alkaline lysis 離下菌,去掉broth soln 1 : GTE 菌的等張液,維持菌的完好務必使菌完全懸浮加soln 2：SDS和NaOH SDS=detergent,破菌 NaOH=使DNA變性(denature),由雙股打開為單股型式混勻即可,切勿劇烈混合使genome DNA斷裂加soln 3：加酸(我用醋酸鉀) 中合soln2,務必混合均勻此時plasmid DNA因片段較短,馬上renature 但genome DNA片段較大,不及馬上renature 離心,捨去懸浮(lipid)&沉澱物(protein,genome DNA等),取出液體加入100% EtOH沉澱,離心去除上清液(有genome DNA) 留pellet=plasmid DNA 以70% EtOH wash　乾燥後得plasmid DNA, 溶於適量水或TE buffer內 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.222.64.102

推

enisx

推 140.112.25.191 02/17, , 1^F

推 140.112.25.191 02/17, 1^F

推

KLAHA

推 61.222.64.102 02/17, , 2^F

推 61.222.64.102 02/17, 2^F

推

isotoper

推140.112.240.226 02/17, , 3^F

推140.112.240.226 02/17, 3^F