作者查詢 / IMR32
作者 IMR32 在 PTT 全部看板的留言(推文), 共50則
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1F→: 我有遇過類似的問題,但對像不是你的蛋白,之後是細胞培養06/22 07:25
2F→: 時,除了sodium bicarbonate,另外補25mM HEPES,就好了06/22 07:28
3F→: 廠商給的標準品標明是要在ph9的sodium bicarbonate溶液中06/22 07:30
4F→: 不清楚你是不是也是相同的問題06/22 07:33
313F推: finaldata05/30 14:02
104F噓: .02/04 22:48
2F→: 如果你是用傳統方法,用ligase以blunt end的方式黏進去01/25 13:14
3F→: 必須考慮合成的primer,5端無phospho group,必須kinase01/25 13:15
4F→: 處理過01/25 13:15
5F→: 另外,如同一樓,因為你只切一刀,還是以定序為準01/25 13:16
18F噓: 還給唐宋元明清後代,選一個01/22 08:48
1F→: 建議你加一下3-5%DMSO01/18 22:20
7F→: 因為你的引子長度差太多,就在這周,學弟也是類似的問題01/19 16:19
8F→: 一樣是以plasmid當template,兩primer一長一短,低溫時產物01/19 16:21
9F→: 長度不對,高溫時,全部都是primer dimer01/19 16:23
10F→: 第三次就加3%DMSO+gradient,結果任何溫度都有出來01/19 16:25
11F→: 因此你的問題,我認為是長的那一條沒有解開所致,至於DMSO01/19 16:28
12F→: 你可以查詢dmso VS pcr,若實驗室有閒錢,也可用BETAINE01/19 16:29
20F→: 95是解開了,但回來72or68時,primer自黏比黏template高時01/20 17:41
21F→: 就會沒0.9k只會有一兩百b.p.的primer dimer,因此若是你發01/20 17:43
22F→: 現主產物是一兩百的話,建議你加DMSO,annealing tem.直接01/20 17:44
23F→: 72,elongation一分鐘即可,我建議你做看看,不到一小時半01/20 17:46
24F→: 就可確定01/20 17:46
25F→: 但我發現你短primer只有26,你有確定可黏上的部分有超過18?01/20 17:47
40F推: 欺負我老婆,怒買十隻lg手機140.109.49.205 01/14 09:30
3F推: 我選出五十萬的01/02 15:51
17F推: 請問八卦版板主群,你們為婦女做了什麼12/26 15:53
16F推: 要是有現場照片,那就好玩了12/25 22:09