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作者 CSFV 在 PTT [ Biotech ] 看板的留言(推文), 共38則

限定看板：Biotech

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[求救] SDS-PAGE上膠會阻擋loading

[ Biotech ]48 留言, 推噓總分: +8

作者: QuteMango - 發表於 2023/05/13 17:36(1年前)

32^F推CSFV: 上膠凝30分鐘左右即可05/16 00:28

33^F→CSFV: 我泡整塊的native gel (TBE buffer, 5% glycerol, acrylami05/16 00:28

34^F→CSFV: de/bis=29:1)不時也會出現文中所述的薄膜，解決方法是把tip05/16 00:28

35^F→CSFV: 插到well最底部再load下去XD。至於SDS上膠倒是沒遇過這情況05/16 00:28

36^F→CSFV: 個人覺得跟是否放過夜凝固沒有關係，但也想不出有什麼原因05/16 00:30

[求救] western blotting 器材

[ Biotech ]8 留言, 推噓總分: +2

作者: billy0225 - 發表於 2022/11/23 15:07(1年前)

8^F推CSFV: ebay什麼都有XD12/01 17:09

[求救] incubator發霉如何清潔

[ Biotech ]30 留言, 推噓總分: +7

作者: dawnga - 發表於 2022/01/22 14:50(2年前)

5^F→CSFV: 可怕@@ 我們跟購買的廠商有簽約會定期清潔01/22 19:52

Re: [求救] 求救 medium不小心加熱到62度能用嗎？

[ Biotech ]9 留言, 推噓總分: +2

作者: twnndnpdnc - 發表於 2022/01/10 23:35(2年前)

1^F推CSFV: 居然！從來沒想過耶01/11 12:41

[討論] 點突變如何成功

[ Biotech ]15 留言, 推噓總分: +5

作者: nm768417 - 發表於 2021/09/14 15:18(2年前)

4^F推CSFV: annealing溫度調低一定接得上吧？倒是可能增加非特異性結合09/15 00:33

5^F→CSFV: 的機率，primer設計阿肥乍看之下沒什麼問題，硬要說的話3'09/15 00:33

6^F→CSFV: 那邊可以再少一個T，點突變兩側GC比例高一些會比較好接上去09/15 00:33

7^F→CSFV: 是說DpnI切O/N不會太久喔？現在幾乎都time-saving，15分鐘09/15 00:33

8^F→CSFV: 就搞定，阿肥頂多給他切到一個小時，切久好像容易出事09/15 00:33

10^F→CSFV: 我預設原po是不小心打錯，實際上有改XD09/15 08:00

[求救] Transformation失敗

[ Biotech ]86 留言, 推噓總分: +24

作者: AndrewsLiu - 發表於 2021/09/08 00:38(2年前)

14^F推CSFV: 推insert海暗黑大法09/09 00:05

30^F推CSFV: 幾乎都有成功喔~老實說我都沒在管insert跟vector 比例，反09/09 23:21

31^F→CSFV: 正就是幹你娘塞爆，硬要算的話絕對都超過10：1，每次都是塞09/09 23:21

32^F→CSFV: 1.7kb的DNA進4.4kb的質體，屢試不爽，真心推薦09/09 23:21

33^F推CSFV: 另外insert>2kb的話，建議recovery跟後續塗盤培養都在室溫09/09 23:27

34^F→CSFV: 就好(25-30°c)，溫度高的話細菌會把不喜歡的質體片段踢掉09/09 23:27

72^F推CSFV: kana半衰期沒那麼短吧？我們泡完兩三個禮拜都還堪用欸，09/11 08:59

73^F→CSFV: 濃度50 microgram/ml。倒是amp半衰期就很快，大概泡完超過09/11 08:59

74^F→CSFV: 三天我就當作他沒加過，用之前再塗上200 microgram/ml的量09/11 08:59

75^F→CSFV: 抗生素濃度太低的話，反而質體收不到刺激，複製效果會很差09/11 09:01

[求救] 免疫沉澱（IP)問題

[ Biotech ]34 留言, 推噓總分: +5

作者: dawnga - 發表於 2021/08/21 12:41(2年前)

3^F推CSFV: 珠珠load進去沒關係，會卡在well裡面，不會跑進膠裡面08/21 21:52

4^F→CSFV: 之前做完IP要拿去打質譜前是這樣弄的

[求救] imageJ定量SDS-PAGE的強度

[ Biotech ]23 留言, 推噓總分: +1

作者: mor05431 - 發表於 2021/08/07 18:05(2年前)

1^F推CSFV: 如果用眼睛看不出背景有無差別的話，其實沒有必要去消耶08/07 21:33

2^F→CSFV: 如果要的話，我是土法煉鋼定出每個lane的強度，丟進EXCEL08/07 21:34

3^F→CSFV: 給他自己去減去08/07 21:35

4^F→CSFV: 有時候太仰賴電腦定量反而會造成最後結果失真，個人經驗啦08/07 21:36

5^F→CSFV: 定量結果最好還是要符合眼睛看到的，畢竟放上論文或期刊的是08/07 21:37

6^F→CSFV: 膠圖本人，口委或審稿人通常還是眼見為憑08/07 21:38

[求救] DNA Purification binding buffer問題

[ Biotech ]15 留言, 推噓總分: +4

作者: Poke0605 - 發表於 2021/06/08 17:08(3年前)

4^F推CSFV: 可能稍微影響純化品質吧，加入酒精目的在於移除鹽類和蛋白質06/08 20:25

5^F→CSFV: 同時也帶走水分，避免核酸被水分拉走，所以才會建議濃度越高06/08 20:27

6^F→CSFV: 的酒精越好，濃度不夠的話可能得到核酸量也會稍微減少。至於06/08 20:28

7^F→CSFV: 是否會影響純化的核酸種類比率？阿肥這點也不太清楚06/08 20:29

8^F→CSFV: 個人認為如果後續反應不會受到鹽類干擾的話，95%應急一下是06/08 20:30

9^F→CSFV: 無妨啦～06/08 20:31

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