[難過] 實驗又失敗了消失

看板WomenTalk作者時間7年前 (2016/12/28 14:27), 7年前編輯推噓32(36推 4噓 50→)
留言90則, 45人參與, 最新討論串1/3 (看更多)
明明只是個簡單的SDS 為什麼可以出那麼多狀況 為什麼電泳跑不動 為什麼無論我怎麼裝它都會漏水 明明只要一小時的東西我用起來跑了快要12小時 為什麼染完的膠全部碎掉變成一坨 有好多人在等我的實驗結果 大家都要做報告 大家都準備了樣品給我跑膠 我居然跑到膠碎掉了 也已經沒有多餘的樣品重做了 到現在還不敢跟老師說我又搞砸了 不知道該怎麼跟同學交代話花三個星期做的實驗居然在最後ㄧ步驟失敗了 好害怕...... 好想哭...... ----- Sent from JPTT on my HTC_M8Sx. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 36.231.151.225 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/WomenTalk/M.1482906438.A.2AA.html
推
12/28 14:27, , 1F
拍拍
12/28 14:27, 1F
推
12/28 14:28, , 2F
幫QQ
12/28 14:28, 2F
噓
12/28 14:29, , 3F
幫你組員噓你
12/28 14:29, 3F
推
12/28 14:31, , 4F
做實驗心要細，要承受的起失敗，出問題要找原因，不然
12/28 14:31, 4F
→
12/28 14:31, , 5F
不適合走研究這條路
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我有發現我不適合QQ
推
12/28 14:35, , 6F
噢噢噢噢 你慘了 GGGGGGG
12/28 14:35, 6F
→
12/28 14:39, , 7F
QQ
12/28 14:39, 7F
推
12/28 14:43, , 8F
完全看不懂
12/28 14:43, 8F
推
12/28 14:47, , 9F
碎掉...你慘了GGGGG
12/28 14:47, 9F
推
12/28 14:50, , 10F
這哪這哪科系的實驗啊
12/28 14:50, 10F
生科....
→
12/28 14:52, , 11F
通常1小時需要跑12小時應該是膠濃度太高 可是跑完又碎掉感
12/28 14:52, 11F
→
12/28 14:52, , 12F
覺應該是水水的 膠濃度不高 這 怎麼感覺很矛盾? 先找到問題
12/28 14:52, 12F
膠我完全按照配方做啊 搖台設50rpm好像真的太快了
推
12/28 14:52, , 13F
研究生壓力真的大 拍拍
12/28 14:52, 13F
每天進實驗室之前都在門口深呼吸.....
→
12/28 14:52, , 14F
所在吧 是不是什麼東西沒加之類的...
12/28 14:52, 14F
→
12/28 14:54, , 15F
c會不會是染色時的搖台設的速度太大之類的...
12/28 14:54, 15F
推
12/28 14:55, , 16F
SOP看清楚，膠的比例有調配好嗎？一開始架膠時，為何沒
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12/28 14:55, , 17F
先檢查好會不會漏再loading,之後染膠會碎，原因也是出
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12/28 14:55, , 18F
在一開始的膠比例，做實驗心要細
12/28 14:55, 18F
膠片都是按照配方做的 我只能想到是配下層膠的時候 因為我怕會怕直接使用濃鹽酸 所以是用1N的溶液配的 但配出來的體積跟pH都沒錯我就想說那就這樣吧 ※ 編輯: chith (36.231.156.82), 12/28/2016 14:58:48
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12/28 15:02, , 19F
裝起來會漏水你還敢跑
12/28 15:02, 19F
在做膠的時候沒漏啊 我換了兩個電泳槽都還是會漏 而且我有時間限制在今天一定要跑完 想說buffer會漏那我就補buffer進去吧 每天一個人留在實驗室到半夜腦子會變得怪怪的@@ ※ 編輯: chith (1.161.132.169), 12/28/2016 15:16:02
推
12/28 15:27, , 20F
這麼簡單的東西大二應該就可以得心應手了吧 QQ
12/28 15:27, 20F
推
12/28 15:48, , 21F
你組員才需要QQ
12/28 15:48, 21F
推
12/28 15:48, , 22F
怎麼可能是研究生?小大一還可以原諒
12/28 15:48, 22F
推
12/28 15:51, , 23F
不是要先測漏嗎@@ 膠台下面(海綿那裡)墊一塊parafilm
12/28 15:51, 23F
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12/28 15:51, , 24F
會比較不會漏~
12/28 15:51, 24F
推
12/28 15:53, , 25F
噢好吧沒看到是跑膠時會漏水，我以為是製膠
12/28 15:53, 25F
推
12/28 15:54, , 26F
幫QQ
12/28 15:54, 26F
推
12/28 15:58, , 27F
慘慘慘
12/28 15:58, 27F
→
12/28 16:02, , 28F
膠體電泳我們高中實驗就有了...你組員好慘 而且膠
12/28 16:02, 28F
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12/28 16:02, , 29F
跟樣品都很珍貴的
12/28 16:02, 29F
推
12/28 16:05, , 30F
請人再帶妳做ㄧ次吧～實驗失敗心情真的很差QQ
12/28 16:05, 30F
推
12/28 16:24, , 31F
你沒拿學長姐的SOP嗎？
12/28 16:24, 31F
推
12/28 16:38, , 32F
請好心的學長姐幫忙比較能知道是哪個步驟錯了 邊緣人QQ
12/28 16:38, 32F
→
12/28 16:39, , 33F
而且失敗不需要害怕 越怕越會錯 大不了晚點畢業
12/28 16:39, 33F
推
12/28 16:55, , 34F
確定running buffer濃度，電壓設定，sample處理過程有沒
12/28 16:55, 34F
推
12/28 16:57, , 35F
沒有問題。
12/28 16:57, 35F
推
12/28 17:26, , 36F
拍拍 哭一哭繼續努力
12/28 17:26, 36F
推
12/28 17:56, , 37F
buffer會漏應該是沒壓緊或你玻璃沒放好，膠有問題的話，
12/28 17:56, 37F
→
12/28 17:57, , 38F
marker跑出來應該也不正常
12/28 17:57, 38F
推
12/28 18:02, , 39F
還有你配膠的buffer 有校正pH值？
12/28 18:02, 39F
推
12/28 18:08, , 40F
大二實驗課電泳一次就跑過, 給你拍拍.
12/28 18:08, 40F
噓
12/28 18:28, , 41F
快換人跑吧
12/28 18:28, 41F
推
12/28 18:53, , 42F
趕快去重考醬料
12/28 18:53, 42F
噓
12/28 19:45, , 43F
看到都覺得幹 不用說你組員了
12/28 19:45, 43F
→
12/28 19:45, , 44F
我能懂你的心情，我也曾經發生過幫別人做實驗結果搞砸
12/28 19:45, 44F
→
12/28 19:45, , 45F
的狀況......當下確實很不好受......不過事情都發生了
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→
12/28 19:45, , 46F
，還是要鼓起勇氣好好面對......
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推
12/28 19:49, , 47F
Please call out ...
12/28 19:49, 47F
推
12/28 20:22, , 48F
以為來到生科版
12/28 20:22, 48F
→
12/28 20:43, , 49F
幫你QQ
12/28 20:43, 49F
→
12/28 20:46, , 50F
配下膠為什麼需要鹽酸？
12/28 20:46, 50F
因為我用的是tris-hcl
→
12/28 20:47, , 51F
做膠沒漏跟跑膠running buffer有沒有漏是兩回事吧…
12/28 20:47, 51F
推
12/28 20:56, , 52F
下膠用的Tris buffer是用Tris-base還是Tris-HCl？弄錯的
12/28 20:56, 52F
→
12/28 20:57, , 53F
話經過調pH值後離子濃度會不對，導電度也有差
12/28 20:57, 53F
→
12/28 20:58, , 54F
然後通電是固定電流還是固定電壓？一般小膠固定電壓80V
12/28 20:58, 54F
→
12/28 20:58, , 55F
的話，起始電流大約在20mA左右，隨著時間電流會下降；反
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→
12/28 20:59, , 56F
之，若固定電流20mA跑，起始電壓約80V，隨時間電流上升
12/28 20:59, 56F
我用的那台是100V 20mA在跑 有試過把電壓調高結果機器冒煙了
→
12/28 21:00, , 57F
跑到底電壓約150V到200V。超過或低於這些數字太多都要注
12/28 21:00, 57F
→
12/28 21:01, , 58F
意，有可能是膠的buffer濃度錯了，或running buffer錯，
12/28 21:01, 58F
→
12/28 21:01, , 59F
或是你架電泳時只架一邊另一邊白金線被buffer淹過造成短
12/28 21:01, 59F
→
12/28 21:02, , 60F
路等等。就算你膠沒配錯，後面那些錯了，導致跑膠時電流
12/28 21:02, 60F
→
12/28 21:03, , 61F
電壓不對造成膠體過熱，可能會使膠脆化，在染的時候就很
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→
12/28 21:03, , 62F
容易會破掉。
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→
12/28 21:06, , 63F
話說就是這樣所以我才堅持自己的sample自己跑，至少成敗
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→
12/28 21:06, , 64F
自己承擔
12/28 21:06, 64F
推
12/28 21:11, , 65F
是用幾%的膠? 染色的搖台我都設60rpm也沒事 可能你盒子液
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→
12/28 21:11, , 66F
體太少 為什麼下層膠會用到濃鹽酸@@ 是調Tris的pH值時用
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→
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的話根本不會影響 buffer會漏的話應該是電泳台側邊的軟
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→
12/28 21:11, , 68F
管不服貼 總之多練習吧@@
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12/28 21:44, , 69F
而且tris buffer通常都配一個stock在用，很少臨時才配的…
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→
12/28 21:44, , 70F
甚至後來都直接買配好的
12/28 21:44, 70F
第一次配的膠都不凝 被懷疑是buffer放太久 所以就全部重配了 ※ 編輯: chith (223.137.23.187), 12/28/2016 22:04:42
→
12/28 22:03, , 71F
跑這麼多次從來沒失敗過
12/28 22:03, 71F
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12/28 22:04, , 72F
覺得前輩沒把你教好，你需要魔鬼訓練
12/28 22:04, 72F
→
12/28 22:07, , 73F
膠不凝首先懷疑的是10%APS吧...
12/28 22:07, 73F
→
12/28 22:08, , 74F
不過你真的很有耐心可以等12小時
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→
12/28 22:08, , 75F
所以現在原PO說得出問題在哪裡了嗎？
12/28 22:08, 75F
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12/28 22:09, , 76F
實驗不是做出來就OK（當然趕DATA的時候是），重點是你要
12/28 22:09, 76F
→
12/28 22:09, , 77F
知道為什麼之前失敗，現在OK
12/28 22:09, 77F
→
12/28 22:11, , 78F
電源供應器通常只能固定其中一個值，感覺你是固定電壓，
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→
12/28 22:12, , 79F
但是某種原因短路造成電流過高，所以才會冒煙
12/28 22:12, 79F
→
12/28 22:13, , 80F
你用的是哪一家的電泳？Biorad(綠)還是Hoffer(紅)的？
12/28 22:13, 80F
推
12/28 22:47, , 81F
加油 過來人（拍拍
12/28 22:47, 81F
推
12/28 23:19, , 82F
慢慢來吧@@ 拍拍
12/28 23:19, 82F
推
12/29 02:07, , 83F
加油 最近實驗也在瓶頸中...
12/29 02:07, 83F
→
12/29 03:01, , 84F
之前我們實驗室transfer的那台機器老是把我的page膠burn
12/29 03:01, 84F
→
12/29 03:01, , 85F
掉...妳的痛苦我完全能理解QQ
12/29 03:01, 85F
推
12/29 03:03, , 86F
12/29 03:03, 86F
→
12/29 03:04, , 87F
然後像圖片發生的這種事也發生在我的agarose膠上過QQ
12/29 03:04, 87F
推
12/29 12:20, , 88F
膠不凝固請先重配APS，跑膠會漏直接內外補滿buffer
12/29 12:20, 88F
推
12/29 21:48, , 89F
釣出一堆生科醫檢
12/29 21:48, 89F
噓
12/29 22:17, , 90F
研究生跑膠還失敗？我還以為大學部勒…
12/29 22:17, 90F
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文章代碼(AID): #1OOrj6Ag (WomenTalk)
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