Re: 上一屆的血液考古
※ 引述《smartcat (我是大磁鐵*.*)》之銘言：
: 林亮音部份
Hb EP的原理QC和判讀
不同form的Hb其帶的charge正負及大小的不同，跑電泳會有不同的移
動速率。Hb在heme的部份各個form都相同，因此決定其charge的就是
globin的部份了，不同的a.a.組成便會影響不同的charge。之後再用
Ponceau染色，和control組做比較即可得知各個band分別是什麼form
的Hb。
判讀：
1.各種form的Hb在pH 8.6時的移動速率，由大到小依次為：
HbH > HbBart's > HbJ > HbA > HbF > HbG, HbS > HbA2, HbC, HbE
2.一般normal value：HbA + HbF－95.8~97.6%；HbA2－2.4~4.2%
: RBC脆性試驗原理和判讀
原理：
http://www.accuspeedy.com.tw/A16_search_items/021_hemotology/1800
_RBC_fragility.htm
兩行連在一起
判讀：
normal value 對照表請參照講義
1. OFT increased
(1) Hereditary sphorocytosis
(2) Hemolytic anemia of new born
(3) Autoimmune Hemolytic anemia
(4) Severe (Gr. III) burn
(5) Conditionas in which spherocytes are present
2. OFT decreased
(1) IDA
(2) Thalassemia
(3) Liver diseases with jaundice
(4) Sickle cell anemia
(5) Polycythemia vera
(6) Conditions in which target cells are present
: Ham test跟Sugar water test的原理和判讀
Ham test：
The definitive test for diagnosing paroxysmal nocturnal
heamoglobinuria (PNH). The red cells are tested for
resistance to lysis during incubation with acidified fresh
serum. Lowering of pH results in complement lysis of red
cells with the PNH defect.
: HbF determination(1min alkaline denaturation method)的原理和判讀
本實驗用的方法是 1 min. alkaline denaturation method，利用HbF (fetal Hb)
對於鹼性溶液的抗性，O.D.較強，故用鹼性的NaOH處理，此時normal Hb 會被
denature，但HbF不會。加入NaOH後1 min. 再加(NH4) 2SO4 mixture以停止denature
的作用，並使denatured Hb沈澱下來，再測量soln.的吸光值，以和control組
（未加NaOH）的比值表示，即為HbF在total Hb中的比值。
判讀： 計算(ODsoln. B × 50) /( ODsoln. A ×200)並以percentage表示之
Normal value：＜ 2.0 %
: HbA2 determination by microchromatographic method的原理和判讀
用的是micro chromatographic method。利用Helena HbA2 Quik
Column來進行陰離子交換層析法。column中的resin是帶正
電的小顆粒，而加入developer時，大部份Hb會帶負電而會bind to
resin，但HbA2不帶電而會被沖提出來，故將沖提液在415 nm下測
O.D.值，即為HbA2及其他在developer中不帶電的Hb之吸光值。
判讀：O.D.C/ (O.D.D × 5)．以percentage表示之
normal value：＜3.5 %
:
以PCR來檢測B-thalassemia的原理和判讀
利用分子診斷學偵測thalassemia genes。β-Thalassemia是由於 左 右
gene mutation所造成的疾病，且多為point mutation，故若
mutation的位置正好在RE site (Restriction enzyme site)上，則 ___
會影響到restriction enzyme能不能切，故我們可先用PCR amplify ___
specific sequence，之後用RE處理過後去跑電泳後會出現如右圖的
結果，左邊是有RE site的，由於被切了故出兩條較輕的bands，跑得 ___
較快；右邊是無RE site的，無法被切；故只有一條跑得較慢的band
。藉由此來區分有否mutation。
但常見的β-thalassemia mutation並不是那麼剛好就位在RE site上
，故我們用的是ACRS (Artificial Created Restriction Site，人
工創造的RS)。
判讀：
（假設Normal會被切，Mutant不會被切）
如右圖，由於β-thalassemia的gene是由一對alleles所控制，故會
出現三種結果：
1.Homozygous Normal (N/N)－兩個genes皆normal，故二者皆會被
切而使長度變短，跑得較前面。其實應該有兩個bands，但因為被切
的位置很靠近其中一端，故有一段十分短，會跑過頭無法看到。
2. Homozygous Mutant (M/M)－兩個genes皆有mutation，故二者皆
不會被切，跑得都較慢，也只有一個band。
3. Heterozygous Normal/Mutant (N/M)－一個gene normal而另一
gene有突變，故一個被切一個不被切，會跑出兩個bands。
NN MM NM ( N = normal , M = mutation)
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其他闕漏還請諸位多多補充
了月 謹誌
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