Re: [討論] 細菌考古題
1.自動化鑑定不符合手工法(ex: catalase,gram stain )時如何進一步鑑定？不符合的原
因為何？
<ANS>若鑑定結果不合，可能需要重挑菌落或再做subculture的動作然後確實將菌液調至
適當濃渡再上機一次。reagent也要檢查看看是否過期或品質不良。但是事實上細菌室的
做法是如果手工法已經做到有把握，那自動化鑑定的結果只會當參考依據。畢竟電腦data
base有限，而且人腦比較靈活。至於不合的原因可能有以下幾點：
1.沒挑到single colony或挑錯colony 2.菌液濃度不對3.試劑過期或品質出問題
4.電腦data base不足5.細菌是活的，生命總是充滿奇蹟6.人為疏失……等等。
2.如何鑑定NFGNB
<ANS>都是GNB，且TSI管皆為K/K。以下為常見或實習時較有印象的菌之鑑定
Oxidase(+)： Pseudomonas aeruginosa 在MH plate 上為草綠色，BP上灰扁黏
具有水果香
Shewanella putrefaciens 產H2S，TSI管黑
Oxidase(-)：
Lactose(+)：Acinetobacter baumannii colony較大，EMB上呈粉紅色
Lactose(-)：Stenotrophomonas maltophilia ，會利用maltose，可加種一管maltose(黃)
3.何為ESBL?
<ANS>ESBL (Extended Spectrumβ-lactamase)這類細菌能水解更多cephalosporin類抗生
素主要有E.coli，K.pneumonia，K.oxytoca，P.aeruginosa……等等。
cefotaxime,ceftazidime分別及與clavulanic acid合併測試；若合併測試的抑制圈比各別
測試大5 mm以上，即表示是製造ESBLs的細菌。遇到這樣的細菌要小心，因為它們的抗藥性
比傳統細菌強。
4.如何偵測TB？
<ANS>
1.可種L-J agar 並觀查cord factor
2.生化反應niacin(+)；nitrate迳nitrite
3.種MGIT並利用BD的Bactec960判讀結果。長菌生成CO2加強MGIT管螢光反應
4.作acid-fast stain 或auramine-rhodamine 螢光染色
5.HPLC
6.PCR ex: COBAS AMPLICOR? Analyzer 全自動PCR
7. Strand Displacement Amplification (SDA) ex: Becton-Dickinson產品
8.Probe hybridization ex: Genprobe的RNA hybridization
9.LCR( ligase chain reaction) ex: Abbot產品
10.PCR-RFLP
11.western blot 或ELISA測抗體
12.Lateral flow technology 利用標Dig或Biotin之primer pairs 作出含Dig及Biotin之
target sequence。流經streptavidin 標定之gold最後呈色於anti Dig Ab之line。
5.分離鑑定Prevotella 及 Fusobacterium
<Ans>
Prevotella Fusobacterium
kanamycin R S
螢光 紅 綠
染色型態 Fusiform，pleimorphism
6.舉出三種在腹瀉時用來分離腸內菌的培養基，敘述其設計及欲分離之目標
<Ans> a.HE AGAR：分離Salmonella 及 Shigella
發酵lactose使pH indicator(bromothymol blue) 呈黃色。含iron
salt 可測是否產H2S。Bile salt可抑制大部分的雜菌生長。
b.TCBS：分離Vibrio
thiosulfate 和 citrate使medium呈鹼性，bile and cholate抑制
雜菌，vibrio會代謝產酸呈黃色colony
c.Campy-BAP：分離Campylobacter
含sheep blood、vancomycin抑覺 Gram(+),trimethoprim(廣效性),
cephalothin (抑制 streptococci)
7.試述分子檢驗方法及原理
<Ans>
PCR：Sepicific的primer夾出target
Nested PCR：兩對primer，第一次的product做為template再amplify，增加
專一性。
Multiplex PCR：用兩對以上的primer，可同時放大多個基因片段
Real-time PCR：用螢光的probe 即時偵測PCR的產量
(今天珮珊seminar講的molecular beacon、Taqman )
RFLP：restriction fragment length polymorphism
SSCP：single strand conformation polymorphism
ssDNA folding的特殊結構只要有一個base的改變即會不同，利用
SDS-PAGE可敏銳的將conformation有差異的分子分離
PFGE：Pulsed Field Electrophoresis，通過電場的不斷改變，使DNA分子
的泳動方向做相應改變，小的DNA分子比大的變形快，故小分子泳動
得快，在gel上呈現出電泳帶型，可以用於大分子DNA的分離。
Probe hybridization 、 Microarray
DNA sequencing
8.Campylobacter spp.在臨床上的重要性為何？如何鑑定？
<Ans> 常見的細菌性腸胃感染原。引起腹瀉、血便、腸胃炎、fever、
septicemia等症狀。因表面抗原跟神經細胞的Ag相似，可能併發GBS等自
體免疫疾病。
Gram(-)bacilli,菌體彎曲。為microaerophilic 在5%O2 10% CO2 42度C
CAMPY BAP 培養兩天以上。Colony 為灰色黏狀，Oxidase(+)。
細菌室做hipurate hydrolysis(+)發C.jejuni,(-)發C.coli
13.敘述TSI, VP test and citrate 的原理與判讀法
<Ans>
TSI:trisuger iron agar
一種斜面固體培養基，內有lactose, sucrose and glucose(10:10:1)
可以同時看利用醣類,產生H2S和產氣的情形。
當結果是黃色，代表有利用醣類(可以用lactose and sucrose)進而產生酸，
而紅色就代表沒有利用醣類；若是黑色，就代表有產生H2S。
VP test:Vogas-Prokauer test
用來測細菌是否會產生glycol and Butanediol(兩個Acetoil合成)
產生acetoil代表細菌利用glucose的時候，最後並不是進入TCA cycle，
而是產生其他的產物。
加入creatine, KOH and naphthol時，若為紅色，則視為positive
citrate test
可以用來測試細菌是否可以直接運送citrate進入當作碳源，進入TCA cycle利用
若是呈藍色，代表basic，就是可以直接利用citrate，視為positive
14.Str的鑑定流程與方法
GPC─catalase(-)→Str or Enterococcus
GBS: CAMP(+)
enterococcus: Bile-esculin and 6.5%NaCl (+)
Str. pneumoniae: optochin (S) bacitracin (R)
others: grouping
catalase test: bac + catalase → 起泡泡 視為positive
CAMP test: 利用S. aureus與目標菌種種在BP(T型),若是隔天有箭頭!!!視為CAMP(+)
Bile-esculin:將菌種在Bile-esculin，隔天有長且有黑色，視為positive
6.5%NaCl:將菌種在6.5%NaCl，隔天有長，視為positive
grouping:利用其antigen對應的antibody作grouping
15.台大常見的NFGNB的兩隻菌，如何鑑定
Ps. a
AB
GNB→TSI(K/K)─oxidase→(+)─Arginine(+) 42度(+)→Ps. a(蘋果綠+水果香)
(-)─glocose (+) maltose (-)→AB
16. Sta的鑑定流程與方法
GPC─catalase(+)→coagulase (+) S. aureus →OX(R):MRSA, 可能有雙重溶血圈
(-) CNS
17.細菌室如何偵測TB感染?(請以傳統法及分生法說明)
18.如何對Listeria monocytogenes做鑑定?(5%)
19.台大醫院細菌室如何鑑定 S.pneumoniae 對penicillin是否有
抗藥性?你認為此法正確嗎?還有其他方法嗎?
20.試述知道細菌的運動性的方法(10) 機器血液培養的原理(10)
敘述細菌室現在有做PCR的檢驗為何(10)
21.說明目前腸內菌鑑定方法趨勢為何?(請以分生方法為基礎)(30%)
22.Please describe the molecular methods used for rapid
diagnosis of Samonella typhimurium
23.How to detect the presence of bacteria in blood of a patient
with fever?
24.Please describe the processes for isolation and identification
of anaerobic bacteria in clinical laboratory
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