森林生物技術概論---葉開溫
農桿菌由植物的Tuber進入
TI plasmid -Nopaline
--差別不大,均為細胞分裂素Cytokinine
--Octopine
轉殖 Cloning (之前曲芳華老師有講過,有圖,可再看一下)
1. tissue culture regeneration
2. interest genes
3. binary vector(雙向載體),modified Ti plasmid
4. Agrobacterium(農桿菌) transformation
5. Agrobacterium infection (gene delivery)
6. transgenic plant seletion(篩選)
植物被感染後會釋放 acetosyringone 誘使(induce) agrobacterium 的細胞活化,
最後T dna進入植物體。
RB T-DNA LB
\---------------/
| |
| Ti plasmid |
---------------
LB:Left border
RB:Right border
Illogical recombination
Imprecise insertion
轉殖成功
1. transgene expression level
(1) promoter activity(conshitutive 恆定型&inducibe 誘導型)
(2) product accumulation 增加,protein localigation---Vocuole
---ER
2. transgene stability
MAR sequence :matrix-attachment region
(1) protein targeting
(2) vacuolor signal peptide
(3) ER signal peptide
*葉綠體 Chloroplast
優點:
(1) chromosome 大多能光合作用
(2) 母系遺傳---較穩定
--
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