Re: [請益] 想了解電生理實驗

看板Cognitive作者rainheart (追求卓越)時間12年前 (2013/11/27 12:44)推噓4(4推 0噓 0→)

留言4則, 4人參與討論串2/2 (看更多)

※ 引述《rich34877 (richard)》之銘言： : 因為目前沒做過電生理實驗，所以看到paper有電生理的DATA : 有點吃力 (以往只念過初階的生理學) : 源由:主要是探討發炎激素於神經系統的影響，所以接觸到神經生理 : 但實驗室沒人做過，找google神大卻幾乎是簡體，有查到許多 : 研究生的論文PDF檔，但還是似懂非懂，所以想爬文請教各位。雖然這和認知神經科學使用的電生理方法不一樣,但這是我們實驗室在做的東西我試著給你一些解釋 : 想問: : 1.什麼是細胞外電生理活性紀錄? : 是利用NaCL刺激細胞興奮?產生去極化而測EPSP?那為什麼測細胞外? : 而只能測EPSP嗎? 神經細胞藉由電(例如, 動作電位)和化學訊號(神經傳導物質, glutamate, GABA等)傳遞訊息. 當突觸後神經細胞的樹突接收到興奮性神經傳導物質,細胞內depolarized, 細胞外相對hyperpolarized,理論上可以在細胞外(樹突所在位置)放置紀錄電極獲得訊號但是,單一細胞訊號過小,通常只有在細胞同向排列一致下(例如在海馬迴或皮質),才能測量到較大的訊號(即field EPSP,fEPSP). 要刺激突觸前細胞有很多方式,電刺激其細胞軸突,或是加入KCl(bath or local)等等. NaCl是細胞外液的主要成份,所以一般會加在刺激電極的溶液中. 細胞外測量是因為實驗比較容易完成,且能反映一群細胞的變化,但是也因此解析度有限. 如果實驗中沒有在bath加入任何blocker,那測量的訊號僅能解釋為fPSP,若有加入 GABA receptor blocker,測得訊號應為fEPSP;而加入glutamate receptor blocker,訊號應為fIPSP. 可參考Chiang, et al. 2012 J Neurosci http://ppt.cc/xUCY : 2.什麼是細胞內電生理活性紀錄? : 是利用醋酸鉀使細胞怎了?為什麼測IPSP? : 3.什麼又是全細胞電生理? 相對於細胞外紀錄,你可以將電極"插入"細胞內測量細胞內外電流或電位變化,但是因為電極的電阻過大,或是細胞因此破洞導致訊號測量不準.Neher和Sakmann在1970年代發明 Patch Clamp的技術,大幅提升訊號測量精準度,全細胞紀錄(whole-cell recording)就是其中一種測量方法,可以將細胞控制在特定電位(Voltage-clamp)測量電流變化(EPSC or IPSC),或是注入電流(Current-clamp)觀察電位變化(EPSP or IPSP). : 4.sIPSC 的data是看頻率還是振幅?頻率低表示什麼?振幅低又表示什麼? : mIPSC 什麼是微抑制性突觸後電流 : sEPSC 是什麼? : mEPSC 是什麼? s: spontaneous,自發性的訊號,包含了動作電位產生的傳導物質釋放,以及無關動作電位的傳導物質釋放. 端看實驗設計所加入的blocker,推論測量訊號是興奮或抑制性 m: miniature,自發性的微小訊號,當動作電位無法產生時(加入TTX, Na channel blocker) 仍然可以觀察到的vesicle release. 這兩個實驗通常會分析frequency和amplitude. 在sIPSC中,lower fre可能反映了抑制性神經元變得較不興奮(lower excitability, lower mini release probability, fewer number of functional synapses); lower amp則可能是lower release probability, fewer number of postsynaptic receptors, 等等. 不過以上實驗通常需要其他實驗來支持其某種可能推論. : 我的信箱:s0618@livemail.tw 因為問題很多所以拜託各位了感恩 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.39.210

推

mulkcs

11/27 14:31, , 1^F

11/27 14:31, 1^F

推

rich34877

11/27 22:11, , 2^F

11/27 22:11, 2^F

推

skylikewater

11/28 23:40, , 3^F

11/28 23:40, 3^F