[實驗] 請教HPLC如何將peak拉開

看板Chemistry作者 (無智亦無得)時間7年前 (2016/08/31 13:22), 7年前編輯推噓10(10推 0噓 25→)
留言35則, 8人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
小妹就讀某國立大學 暑假在實驗室學習HPLC 使用的column為C18 ，250mm x 4.6mm 梯度用全水下去跑 打樣品出來如下圖 http://i.imgur.com/vlegt1p.jpg
請問peak要怎麼拉開 因為三根peak幾乎連在一起@@ 小妹學疏短淺 感謝大家的幫忙^^ ----- Sent from JPTT on my Asus ASUS_Z00UD. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.130.176.192 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Chemistry/M.1472620927.A.968.html
推
08/31 14:21, , 1F
1. C18 column 不能用全水跑，會讓 column 死掉..
08/31 14:21, 1F
→
08/31 14:23, , 2F
2. peak 3分鐘就跑出來，不確定你的流速，但大概是不滯留
08/31 14:23, 2F
流速是1ml/min ，column的體積為4ml(250mm X 4.6mm) 所以大概是4min後流出。 之前column充滿全水後，以ACN上升梯度5%/min分離(流速1ml/min)，也是在4min前出來，所以就改跑一樣流速的水...><
推
08/31 14:26, , 3F
可以換一根不同型態的 column 看看，如 normal phase
08/31 14:26, 3F
推
08/31 14:27, , 4F
全水要怎樣拉梯度? 一定是非極性混水啊
08/31 14:27, 4F
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08/31 14:27, , 5F
3. 如果為已知物，建議提供一下以給予建議
08/31 14:27, 5F
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08/31 14:28, , 6F
4. 若為未知物，可以玩的空間還很大，目前提供的線索太少
08/31 14:28, 6F
推
08/31 14:31, , 7F
C18 雖然有出aqua了但還是不建議全水 如果真的都全水
08/31 14:31, 7F
不好意思還是菜鳥>< 想請問一下C18不適合打全水的主要原因是什麼? 打完也會用ACN跑過清洗一段時間。一開始準備打前都是用全水跑到穩定再打，這樣還是很傷column嗎@@ 謝謝~
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08/31 14:31, , 8F
跑了peak還這樣的話要 要拉開只剩下流速放慢了 把流速
08/31 14:31, 8F
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08/31 14:31, , 9F
減一半在跑一次
08/31 14:31, 9F
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08/31 14:32, , 10F
空針的peak最好也給張圖看一下你的系統體積RT是多少
08/31 14:32, 10F
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08/31 18:37, , 11F
起碼有4根peak 如果東西是已知物去查paper看方法
08/31 18:37, 11F
※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 08/31/2016 19:41:57
推
08/31 21:41, , 12F
跑全水 C18會倒阿~~~~
08/31 21:41, 12F
※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 08/31/2016 21:41:26
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08/31 21:45, , 13F
先看你的東西來自於哪裡 大概裡面是什麼 應該就很好判斷了
08/31 21:45, 13F
推
09/01 11:58, , 14F
sample和column親和力不夠?
09/01 11:58, 14F
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09/01 11:59, , 15F
全部都水應該滿傷C18 column吧
09/01 11:59, 15F
推
09/01 12:33, , 16F
水是高極性，C18是低極性，碰在一起就是GG惹~RIP
09/01 12:33, 16F
OMG@@
推
09/01 13:22, , 17F
C18裡面的填料是非極性的物質 結構問題 就跟蛋白質扔
09/01 13:22, 17F
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09/01 13:22, , 18F
進醇裡面一樣 完全相反的液體會讓結構瞬間變形 C18是
09/01 13:22, 18F
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09/01 13:22, , 19F
非極性結構 純水是高極性 瞬間變形多多少少會有一些無
09/01 13:22, 19F
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09/01 13:22, , 20F
法恢復久了就gg了
09/01 13:22, 20F
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09/01 13:23, , 21F
建議20%有機 把流速放慢
09/01 13:23, 21F
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09/01 13:27, , 22F
洗管柱最好就是50%有機洗一次 20%有機洗一次80%以上有
09/01 13:27, 22F
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09/01 13:27, , 23F
機再洗一次 第一次就用純水還有個問題 通常C18分析的
09/01 13:27, 23F
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09/01 13:27, , 24F
極性都不高最少比水低 純水下去 很容易在裡面結晶堵死
09/01 13:27, 24F
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09/01 13:27, , 25F
或破壞填料結構
09/01 13:27, 25F
噢噢噢噢~~原來是這個原因，真的很嚴重啊!!! 太感謝了，不會再繼續用全水跑C18 column啦QQ ※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 09/01/2016 22:12:42 ※ 編輯: awakening72 (140.130.176.192), 09/01/2016 22:14:50
推
09/02 19:58, , 26F
全水或是盡量不要100%去跑會死咖冷喔～還有千萬不要逆洗
09/02 19:58, 26F
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09/02 19:58, , 27F
，樣品跑之前一定要確定沒有雜質(或用小飛碟過濾，當然
09/02 19:58, 27F
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09/02 19:58, , 28F
過濾可能會融出不必要的東西，這都是要做多次測試才知道
09/02 19:58, 28F
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09/02 19:58, , 29F
)。
09/02 19:58, 29F
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09/02 19:59, , 30F
有問題可私訊
09/02 19:59, 30F
嗯嗯 好喔～會多注意一下的>< 非常感謝啊啊啊！
→
09/02 22:05, , 31F
逆洗通常是你用到管柱老化要掛了 為了壓榨最後剩餘價
09/02 22:05, 31F
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09/02 22:05, , 32F
值才會用逆洗 因為填充方向的問題 逆洗也會造成填料破
09/02 22:05, 32F
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09/02 22:05, , 33F
壞
09/02 22:05, 33F
推
09/03 15:47, , 34F
國立哪間阿？
09/03 15:47, 34F
※ 編輯: awakening72 (114.39.122.165), 09/03/2016 20:46:21
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09/04 16:13, , 35F
四分鐘就出來 極性又用這麼大 流速改慢 再換個溶劑
09/04 16:13, 35F
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