Re: [實驗] 新手流column跑液選擇和packing長度

看板Chemistry作者bittywind (既視感下的低語)時間8年前 (2016/03/19 14:22)推噓13(13推 0噓 3→)

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使用TLC以及流column要有幾個觀念 1.點片不要點太大點，有時2個點靠很近你會誤認是一個點 2.在點沒有很大，TLC上顯示卻又拖尾時要考慮一下是不是溶解度不夠好有時化合物帶有一些官能基像COOH等會拖尾是正常的遇到拖尾嚴重的情況可以滴一滴醋酸在溶劑系統裡試試 3.選擇溶劑系統，溶解度為優先溶解度不夠好化合物會在流洗過程慢慢析出會很難收到乾淨的點接著才是控制Rf值距離我自己習慣在0.3~0.5左右拉低通常可以流比較乾淨，但是時間就會拉很長如果點沒有靠很近我就會拉到0.5甚至更高都有可能但建議剛開始不用想求快，練熟了再說少數情況點片雖然拉的動，但是用該溶劑比例卻拉不出來有時是化合物需要到一定的極性才會流出來的緣故可以加大溶劑極性看看然後點很多個，需要每個都分出來看時可以在流column過程中調整溶劑比例試試通常由低極性開始，將前面的點先分開帶出來再加大極性帶出後面的點溶劑系統其實不單只有Ethyl acetate(EA)-Hexane(HEX) dichloromethane(DCM)-Methanol(MeOH)也行不過當MeOH比例到10%以上時溶出來的silica就會不少真的要硬流就是流完再過濾一次吧.. 低極性的情況，DCM-Ether、DCM-HEX、Acetone-HEX等我也有使用過當溶劑系統改變時，點的先後順序也會變動一定要多點片確認一下經驗來說，少苯環的化合物可以用ether 多苯環的化合物試試DCM 剛開始不夠熟練，可以多看paper 找跟自己做的相近的化合物，看看別人的溶劑系統很多還會附上溶劑比例跟Rf值做久了你就會有概念了 4.TLC不只一種固定相一般最常用Silica gel glass plate(Normal phase) 當溶解度夠好，但是點又拉不起來時，就是化合物極性太高可以換成使用C-18的RP-18 glass plate(Reverse phase) 不過價格貴很多如果要用C18流column，有的實驗室會要你回收C18 gel 接著是少數的情況，化合物跟Silica親合性很好或是卡在column上時，可以考慮用Aluminum Oxide 這算是較中性的固定相不過因為親和性較低，容易衝太快多加嘗試再使用有些更專門的實驗室還會訂製特殊的gel 像做生物蛋白的，這又是另一回事了 5.Packing column前，確定gel跟溶劑系統充分攪拌均勻確實震動column讓它緊實當你Loading的化合物量大、極性高 dry-loading會是比較好的方式方法是將化合物溶解，加入適量的silica gel 用減壓濃縮將solvent去除，最好再上真空盡量抽乾 (記得在緩衝瓶塞棉花，不然gel抽上去會損害pump) 殘餘的高極性溶劑都可能會影響流column packing時盡量讓它均勻分布在gel頂端要小心添加solvent時不要讓gel飄起當點靠很近的時候，每根tube不要收多有些人想少洗tube每管都收很多，收光譜才發現雜到其它點還有TLC看不到不代表NMR看不到必要時每一管就獨立測NMR圖目前只想到這些，有想到再補 ※ 引述《ajyy002 (Amine)》之銘言： : 小的我不久前進到一間實驗室做專題>< : 裡面最常用的純化方法就是流column， : 想當然爾，小嘍嘍就被叫去流column啊， : 以前頭頭都會告訴我跑液比例， : 所以一切都很順利 : 直到不久前頭頭試了些新反應，要我自己用TLC找極性 : 而在TLC片上常常分不太開......但是有分開，約0.3cm左右吧 : 但是在流column收產物的時候，常常會兩個點一起出來...... : 我自己覺得可能是管柱長度不夠長， : 而我其實也不太會調整極性，常常TLC片上不是跑不上來就是分不開 : 我們實驗室最常用的跑液是hexane、EA、DCM， : 我主要也是只會用到這三種， : 而關於跑液調配比例和長度我的頭頭都告訴我他是靠直覺和經驗QAQ!? : 所以請問有哪位前輩有相關經驗可以分享嗎？我真的想要學得快一點...... -- 人類追求公正的理性、同時也順從慾望的瘋狂傷害則沉默的站在兩者之間，等待著.. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.114.102.37 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Chemistry/M.1458368577.A.C26.html ※ 編輯: bittywind (140.114.102.37), 03/19/2016 14:25:30

推

evanzxcv

03/19 15:10, , 1^F

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evanzxcv

03/19 15:10, , 2^F

03/19 15:10, 2^F

推

chem17

03/19 15:26, , 3^F

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