Re: [實驗] HPLC移動相內 加入 酸or鹽
※ 引述《suila (水一啦~~)》之銘言：
: 各位前輩好：
: 小弟目前正在學習HPLC分析，目標是要同時檢測A、B兩物質。
: 查詢paper後發現，
: 單純分離A物質時移動相條件大多為ACN+TFA
: B物質 大多為ACN+PBS
: 經查不論在移動相內加入少量酸or鹽類，
: 皆是為了減少分析物和管柱silanol的相互作用，改善peak的拖尾情形...
: 小弟的疑問是，如果要同時分離、檢測A及B，
: 可以直接將移動相設計成ACN+TFA+PBS嗎？
: 麻煩各位前輩給予指教，謝謝...
無論是在溶液中加酸或加buffer，
目的通常都是控制pH值，維持待分物的電中性。
比方說因為你提到A物質是用TFA，
我直覺會想到上面有酸根。
然而這是有一好沒兩好的事，
用TFA就是希望流洗液偏酸的情況下，
你加PBS下去只是在打自己的臉，
增加自己配液麻煩。
個人建議你用ACN+TFA跑B，用ACN+PBS跑A，
如果其中一個組合有明顯問題(時間過久、拖尾嚴重等)，
就用另一個。
如果兩種組合看起來都差不多，
個人會建議你用ACN+TFA的組合，
原因正如前面推文的版友:
當有機相偏高時，
PBS有析出的可能。
這種狀況最容易發生在
1)你一開始在清洗管線的時候
如果趕時間又沒注意，
先用100%PBS，然後用100%ACN，你的HPLC就悲劇了。
2)梯度沖提的時候
當梯度沖提設定過快時，
PBS裡面的salt也會析出。
salt析出的特點是:壓力會不自然的變很小。
雖然說析出的解決辦法也很簡單，
只要用水相再洗一洗就好了，
但是沒事別找自己麻煩。
不過要記得不要讓管柱泡在TFA或PBS裡就是了。
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你也能做到的極大精神攻擊咒語:
來，把工數課本打開。
摘錄自 自學魔法一二三 / 三民出版
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06/05 16:10, , 1F
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