Re: [實驗] HPLC 中 mobile phase 的互相影響之問題

看板Chemistry作者 (木人)時間13年前 (2011/05/30 14:00), 編輯推噓7(7推 0噓 15→)
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※ 引述《HPLC (高效能液相層析儀)》之銘言： : 各位大大好 : 從我們學長姐就教導我們 : HPLC 中 A相 (ACN) 以及 B相 (MeOH)是不能混再一起的 : 會產生大量的氣泡 基本上 不同的溶劑要互溶時 都會產生氣泡 所以移動相配置完成後 就要超音波震盪degas 但如果是有雙pump或有電磁閥系統的層析儀 通常都有搭配degaser (除氣裝置) 這時兩個以上的相就可以分別抽入 在degaser中混合 除氣裝置的原理是用特殊的透氣膜管 讓兩相以上的溶劑於膜管中混合 膜管置於真空內 可以把產生的氣泡逼出 但如果管線原本就有大氣泡 是不能逼出的 所以最好要上線的移動相 都用超音波degas一下 包括純的層析專用溶劑 因溶劑存放時 難免會溶入空氣 : 還有 A相 (ACN) 以及 D相 (Buffer) 也是不能在一起的 : 會產生結晶 緩衝液使用到鹽類 如果跟ACN混合 有可能因溶解度下降而使鹽類析出 基本上會溶出可能是buffer調整得不好 或者是ACN變動太大 (有的跑梯度 最後會用到100% ACN) 不過 這兩個基本上很常混在一起分析 沒有不能一起做 只是實驗時間不要太長 移動相的有機相不要太高 做完實驗馬上洗 (怕析出可以用梯度內最高比例有機相 加入buffer 冷藏靜置看看有沒有析出物) : 我比較好奇的是...這是真的嗎= =? : 有沒有其他實驗室也聽過這樣的傳言?? 這.....不是傳言..... 本來做LC 移動相的部分就要注意氣泡與鹽類析出 只是你們學長姐似乎講得太可怕了.... MeOH與ACN不少分析方法都會混用 ACN加buffer更是蠻常用到的... (google key進去 就有很多了) 有空的話 可以看看儀器相關的論壇 有不少不錯的知識 : 因為現在我們有一台HPLC以前是跑鹽類的 專門一台跑鹽類是不錯 但不代表那一台就不用洗 如果鹽類析出太多 很有可能刮傷pump內部的寶石柱塞桿及寶石球 : 現在沒再跑 小弟要用這台HPLC進行分離Q_Q : 可是一直洗不乾淨 : 沒裝上Column 80:20 (MeOH:H2O) 流速0.2 mL/min 壓力就來到 20 若是一般的LC 0.2 mL/min的背壓有20 拉到1 mL/min可能就100多了 如果你們用的機型是日本的那兩間 最大壓力設250那種 那應該不只一個墊片掛了 建議分段拆卸 看到底是哪幾顆墊片有問題 然後用水洗一段時間 (不要上管柱) 再看有沒有把背壓洗下來 不然就要換墊片了 : 可是一裝上Column 壓力就會慢慢上升 我看過最誇張到 60 (我不知道單位耶= =") : 有學長叫我用ACN 可是我又怕上面說的會產生結晶 所以才上來問問 用ACN幹嘛?? 洗管柱嗎?? 如果是的話 0.2 mL/min 一般的4.6 x 150 mm的管柱 這支也有問題了... 一些想法分享 有錯再請版友指正 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.33.236.174 ※ 編輯: shiaobau 來自: 114.33.236.174 (05/30 14:10)
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我們是用 HITACHI 的 我們有把可以拆的 都拆下來震 怕是鹽類
05/30 14:58, 1F
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05/30 14:59, , 2F
堵塞 剛剛看了一下 100%純水 流速0.2 壓力是 11
05/30 14:59, 2F
震完以後 不裝管柱 從最後端的墊片依序鬆開 看背壓多少 不過 100%的純水 本來背壓就會高一點 看你們機子原本保存在什麼樣的溶劑裡 還有 純水很容易長菌 用完最好所有管子裡都換成有溶劑的移動相 就算要放純水 也要加個10%左右的MeOH或ACN
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05/30 15:00, , 3F
我還沒用ACN洗過 因為怕有結晶產生 所以一直都沒用
05/30 15:00, 3F
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05/30 15:01, , 4F
那個 壓力60 是 MeOH:H2O (80:20) 流速0.2
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05/30 15:02, , 5F
所以現在大大是叫我用100%純水沖沖看嚕?
05/30 15:02, 5F
不裝管子 用100%的純水慢慢洗 洗個半天看背壓有沒有掉 沒有掉大概墊片已經掛了 再來看是哪個墊片有問題 最容易塞的大概是最靠近purge那個墊片
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05/30 15:05, , 6F
壓力最大...我看到他預設是420= =" 不過這樣Column早爆了吧
05/30 15:05, 6F
420是最大的壓力 單位應該是kgf 日本這兩間都用這個單位 ※ 編輯: shiaobau 來自: 114.33.236.174 (05/30 16:09)
推
05/30 17:42, , 7F
我們最常用的是80:20(MeOH:H2O) 我們Column保存液也是這個
05/30 17:42, 7F
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05/30 23:04, , 8F
寶石球一顆2000 超貴~
05/30 23:04, 8F
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05/31 10:05, , 9F
超音波震盪大約5分鐘就好
05/31 10:05, 9F
最好還是看溶劑混合的狀況 我個人是看震盪時產生的氣泡 如果還是大顆 而且很多 那就繼續震 如果已經是小小的氣泡 靠液面處的話 就可以拿起來了
推
05/31 17:14, , 10F
我剛剛測試 80:20(MeOH:H2O) 流速1 mL/min 壓力 136 =_="
05/31 17:14, 10F
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是Column的問題嗎= =?
05/31 17:14, 11F
其他的條件呢? 那種管柱 溫度等等 不過如果要知道是不是管柱的問題 換另一台LC試就知道了 ※ 編輯: shiaobau 來自: 175.180.224.161 (05/31 20:52)
推
05/31 23:43, , 12F
我們Column 放在室溫 C18 關東的 46*250(mm) 5um 這樣
05/31 23:43, 12F
推
06/01 18:19, , 13F
而且我發現 利用保存液 壓力會慢慢的上升耶= ="
06/01 18:19, 13F
推
06/02 10:22, , 14F
136離最大值還很遠阿(誤
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06/02 10:22, , 15F
要洗系統裡面的鹽類，就像原po說的，純水加個10%有機
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06/02 10:24, , 16F
溶劑去洗，洗個一天看情況如何，先開purge洗，洗前段
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06/02 10:25, , 17F
就是讓他直接進入廢液桶，然後關purge洗，假設壓力增
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06/02 10:26, , 18F
加，表是前段系統依舊很髒，可能要請工程師來看(其實
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06/02 10:27, , 19F
直接找工程師最快)purge那顆很像叫做前置濾心一顆200
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06/02 10:31, , 20F
到300，到此為止都在討論系統，沒牽扯到管柱，洗管柱
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06/02 10:33, , 21F
先高水相洗鹽，之後高有機洗比較易卡的化合物
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06/02 10:35, , 22F
拍謝我對這壓力不熟，都用bar跟psi
06/02 10:35, 22F
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