Re: HPLC相關問題
※ 引述《blank0415 (Miss布藍克)》之銘言：
: 抱歉~再問一下
: 若撇開移動相是哪些溶劑這個問題,
: 梯度條件若是這樣的跑法,合理嗎?
: Time Solvent A Solvent B
: 0 50 50
: 5 10 90
: 8 10 90
: 13 50 50
這樣的梯度條件合不合理 應跟原本的管柱大小有關
如果以分析級的長管柱 (4.6 X 250 mm)來說
它的管柱體積約為4.2 mL
也就代表 要使更換入的溶劑充滿整支管柱 以1 mL/min來算
要約5分鐘
當然 如果要使管柱再平衡一下 可以再把時間多加幾分鐘
(一般來說 剛更換移動相時 至少要平衡十倍的管柱體積
但如果只是調整A、B移動相的配比 則會縮短一些
且如有autosample的話 下一針會晚1~2分鐘)
如果是使用半製備級的管柱 體積會大上許多 要更長的時間
通常以壓力是否回復來衡量
另 這樣的梯度流程 在不同程式下會有不同結果
有的是由0~5分鐘 Solvent A會遞減至10
有的則是5分鐘時Solvent A會直接跳為10 (甚至能選梯度的方式)
若是前者 則於第13分鐘時才跳為50:50
就接著打下一針了 沒有平衡時間 後面的針數RT容易亂掉
若為後者 通常這個打法 是我們要的comp.在5分鐘左右會出來
後面的時間是拿來把管柱裡所有的comp.全洗出來 算是蠻常見的方式
看後來的推文 似乎要5分鐘後基線才會波動
這樣看來應該是第二種的程式
而基線的波動 除了壓力的影響外
不同的溶劑在相同波長下 也有不同吸收
通常每針打進去後 會以該移動相歸零
當然更換梯度時 有不同吸收 就會使基線波動 而整個墊高或拉低
一些想法 如有錯請指正
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◆ From: 114.33.236.174
※ 編輯: shiaobau 來自: 114.33.236.174 (10/18 16:59)
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所謂梯度能不能到達的相關資料是指??
※ 編輯: shiaobau 來自: 112.105.66.39 (10/18 19:25)
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