Re: [學習] 天然物分離過程
※ 引述《mocblp (藤原浩二(豆漿))》之銘言：
: 自從老闆給了這個課題給我之後 我看的paper當然就都偏天然物相關
: 上次報書報的時候就遇到了大麻煩 被釘到翻過去 問題是這樣的
: 在最近看的兩篇paper中 從植物的根部經過萃取之後進行分離是必經的步驟
: 問題是作者"怎樣從這麼多fraction或者不同溶劑萃出來的extract找出我要的"
: 這個才是最大的疑問 而paper根本不會告訴我這些
這些paper當然不會說
這些項目有一部份是實驗室的know how
多半都會寫 但都不會寫得太清楚
: 比如說 把樹皮磨成粉 然後依序以hexane, chloroform, EA, acetone, MeOH, 水
: 各在室溫下萃取24小時(3次) 最後他選擇MeOH extract進行管柱層析
: 在這邊的問題是 如何知道我要的東西會在MeOH extract?
: 假設說 作者想要的是phenolics 是代表作者已經知道要的東西極性大概在哪
: 才會這麼清楚的選擇MeOH extract?
: 之後進行管柱層析 得到一堆fraction 要選擇"要進行下一步分離"的fraction
: (假設今天要做的是抗氧化實驗)是否是把fraction拿去做活性或者assay?
: 上次被釘到翻掉就是敗在這個地方 老師認為一開始不可能那麼快就直接做SiO2 CC
: 而是先做了LC-MS 我對這些的概念真的很薄弱 根本沒接觸過這些東西
基本上 這應是兩個不同的想法
先拿fraction做活性 是以活性來篩選
具活性的 有可能裡面有 new comp.
現在發現 new comp.已經不太有用了
多半是要new的 又有活性
與其做一大堆 最後解出來是new的 但卻沒有任何活性
不如一開始就追有活性的
而LC-MS的部份(個人認為 這老師應該是想打LC-MS/MS)
在有資料庫 以前曾經分析過這類植物成分的情形之下
儀器可以比對出可能的化合物
這種作法是在 已知某些化合物是要的 只是要設計一個純化流程
可以大量取得需要的這些 comp.
當然 使用 LC-MS/MS 第二段的MS圖譜 也可以多少辨認一下 是哪一類的化合物
不過 個人覺得 不如驗一下NMR...
一些看法 有錯請指正
: 有機實驗也都忘光了(助教對不起) 所以上來問了這麼一大堆問題
: 請大家幫忙一下囉 感謝<(_ _)>
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.33.236.174
推
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補充一下LC-MS的部分
目前常用於分析的LC-MS/MS為triple quadrupole(三段四極柱)(這是串聯式質譜儀)
如果用在天然物上 通常為第一段quadrupole篩選出我們感興趣的
某一分子量的化合物 經第二段擊碎後
再於第三段quadrupole偵測擊碎後 各片段之分子量
藉由比對 或與其他相近化合物之裂片值 去猜該化合物之可能結構
另有一種LC-MS稱為 ion-trap(離子阱)(因偵測器只有一具 故只是單MS)
這種的作法 是將某一分子量之化合物抓住
把其他排掉 將其擊碎後 選定裂片再抓住
擊碎後 再選定更小的裂片 再次抓住.....
理論上可做到 MS^n 但受限於進MS的樣品要先氣化
故濃度不能太高 做到後面量太微小 可能偵測不出來
但因裂片可以一直擊碎 理論上所有質譜皆相同的化合物極少
故在定性上是十分良好的工具
最後 如果只是很理想化 沒有研究經費上限的話
有種儀器叫 LC-NMR
用到這個 該fraction裡的comp.是new或known的 對一下圖大概就知道了
如果有錢到能用到這台 當然是打了再來聊.....^^
※ 編輯: shiaobau 來自: 114.33.236.174 (10/06 17:29)
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再補充一下 ESI進樣 濃度不能過高 且不能大量進樣
太濃或太大量 都會汙染進樣頭 而且會影響電離
當然這是所有ESI進樣的問題 不單是離子阱
也就是 如果要符合離子阱的容量 且要使n加大又看得到的話
則必須要拉大樣品的濃度 而ESI卻又不能達到
原本這樣寫 可能會讓人誤會 抱歉
且用氣化這個詞也不太適當
雖然看起來像是氣化 不過其實是電噴霧電離
另補一些常見MS偵測器的比較
http://tinyurl.com/29b6s9g
※ 編輯: shiaobau 來自: 112.105.114.140 (10/06 19:59)
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