Re: [實驗] 請問HPLC..
※ 引述《aspiren (希望vs.期望vs.盼望)》之銘言：
: 最近開始接觸HPLC的實驗
: 遇到了一個問題...
: 情況為: A物質濃度為2ng/uL, 我的注射量為 1uL....>有明顯的peak跑出來
有明顯的peak跑出來
依您說的意思 我的理解 應是peak不高
: 後來因為其他的考量, 老師跟我說進去的量稱為 column mass
: 即如上 2ng/nL, inject 1uL, 則total分析的量為 2ng
^^^^^^^^
兩次的似乎不一樣
: 後來因為其他因素考量必須注射量修改為 5uL
: 所以我就配致了0.4ng/uL的濃度, 注射 5uL
: 但結果就是一直跑不出peak
: 所以想請問有可能是什麼原因?
: 請大家不吝指教
: 謝謝
注射 1uL 您用的是一般LC還是快速分析型的LC??
個人覺得 有可能是注射量的關係
當注射量拉大 在管柱裡的色帶也相對拉大
再加上多少會在管柱裡擴散
可能使峰變寬許多
再加上原本的peak就小
峰一變寬就很難與雜訊判別了
尤其您的量又不高 以一般LC來說
這個量有時已經是定量極限了
另 如果是快速分析型的LC
因為管徑小 填充密
有時不能打太大量進去
太大量可能會有雙峰 且峰較寬的問題
個人建議 您先把濃度拉高 打1uL
再接著打一次5uL
比較兩次的峰寬 若差異太大 就要注意了
另外 如果是快速分析型的 又要看用哪台...
若是waters家的UPLC 試著更換weak wash為溶解sample的溶劑
以上若有錯請先進指教
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