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討論串[討論] His-tag protein 純化問題
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#3
Re: [討論] His-tag protein 純化問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者littlelizard (專注)時間16年前 (2009/09/12 20:02), 編輯資訊
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抱歉這陣子太忙. 完全忘記這件事. 現在才想到上來. 大家真的好熱心. 不黏 我是用Pichia生產胞外的蛋白. 將菌體離心之後收上清液. 應該沒有DNA的問題. 我產生的protein應該算多吧. 之前純化完使用 BioRad Protein Assay 的定量法可得 2 mg/mL total
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#2
Re: [討論] His-tag protein 純化問題
推噓5(5推 0噓 11→)留言16則，0人參與, 7年前最新作者Fourfish (～四條魚～)時間16年前 (2009/09/04 23:59), 編輯資訊
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請教幾個問題：. 1.你的sample黏不黏(稠)？ 黏的話請加點DNaseI試試看. 2.你產生的protein多不多？濃不濃？. 我前陣子的經驗是lysate中protein太多. 一進column就沈澱了 結果就塞管..... 因為你有濃縮的步驟 所以建議不要把protein濃縮的太濃 不然p
(還有812個字)
#1
[討論] His-tag protein 純化問題
推噓5(5推 0噓 9→)留言14則，0人參與, 7年前最新作者littlelizard (專注)時間16年前 (2009/09/03 17:55), 編輯資訊
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大家好. 最近都在做蛋白質純化. 使用的是 Ni-NTA 來純化帶有 His-tag 的protein. 原理和實驗方法我都有從網站上的protocol搞懂了. 也有爬過文. 目前比較困擾我的事情是. 流速會越來越慢......有時候甚至就塞住了 = =. 我們家使用的是自己packing膠體. 我
(還有735個字)
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