IHC染色 脫水封片問題

看板Biotech作者 (什麼)時間4年前 (2020/04/12 23:28), 4年前編輯推噓4(4推 0噓 13→)
留言17則, 6人參與, 4年前最新討論串1/2 (看更多)
各位好，第一次發文，如果有違反的地方還請麻煩糾正>< 最近使用大鼠肺部的石蠟切片4um 染IHC stain 想請問各位最後都是如何脫水封片？ 我們實驗室先前的protocol是寫 85%酒精3分>95%酒精3分>100%酒精3分*3>xylene5分*3>封片 但最近發現梯度酒精脫水之後有一個呈色劑會掉色, 顯微鏡下看signal都不見了（vector 的 fast red 有人也用過這個嗎？） 最近用100%3分*3發現好像就沒有掉色，但好像有脫水沒脫乾淨的感覺？ 然後四處跟別人討論之後發現其他實驗室的IHC染色完後泡完xylene會先在hood內抽乾， 再封片！ 但我們之前都是梯度酒精泡完再泡xylene擦乾玻片背面沒風乾就直接封片了...（學姐還 說不可 以讓玻片乾掉） 想請問一下大家在最後的步驟都是怎麼做的 若是我xylene完直接風乾會讓組織顏色變深嗎？（或是是否會影響hematoxylin的顏色） 另外風乾完會再浸泡xylene再封片嗎？我們實驗室的封片膠含有xylene! 再麻煩各位幫忙解答>< 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 42.77.112.96 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1586705288.A.D58.html ※ 編輯: qaz3468 (42.77.112.96 臺灣), 04/12/2020 23:29:52
推
04/12 23:36, 4年前 , 1F
拜託大家救救他
04/12 23:36, 1F
推
04/12 23:37, 4年前 , 2F
求各路高手幫幫忙
04/12 23:37, 2F
※ 編輯: qaz3468 (42.77.112.96 臺灣), 04/12/2020 23:41:29
推
04/13 21:33, 4年前 , 3F
95%*2-->100%*2-->xylene*2-->不等乾直接封片膠
04/13 21:33, 3F
→
04/13 21:50, 4年前 , 4F
hematoxylin跟ph值有關跟xylene應該無關
04/13 21:50, 4F
→
04/13 22:00, 4年前 , 5F
不要脫水後用水性風片膠
04/13 22:00, 5F
推
04/14 01:37, 4年前 , 6F
掉色的呈色劑一直都是同款同批號嗎？我們每個步驟泡
04/14 01:37, 6F
→
04/14 01:37, 4年前 , 7F
十分鐘，沒有風乾就封片，最後是xylene啊，很多封
04/14 01:37, 7F
→
04/14 01:37, 4年前 , 8F
片膠都含xylene沒有風乾的必要，甚至沒有封好還可以
04/14 01:37, 8F
→
04/14 01:37, 4年前 , 9F
泡xylene重封，但有風乾應該沒關係，我知道的是染
04/14 01:37, 9F
→
04/14 01:37, 4年前 , 10F
色的過程中不能乾掉，不然抗體會bind不上去，都染
04/14 01:37, 10F
→
04/14 01:37, 4年前 , 11F
完到封片了跟染色無關，你先仔細查看看你的呈色劑
04/14 01:37, 11F
→
04/14 01:37, 4年前 , 12F
有沒有問題
04/14 01:37, 12F
→
04/14 01:39, 4年前 , 13F
或直接問該呈色劑的業務
04/14 01:39, 13F
→
05/14 06:37, 4年前 , 14F
我有點看不太懂你的問題。Fast red不是染核的嗎？而原廠
05/14 06:37, 14F
→
05/14 06:38, 4年前 , 15F
廠說明書建議不要洗超過十分鐘可以用來代替hematoxylin
05/14 06:38, 15F
→
05/14 06:40, 4年前 , 16F
所以你用的究竟是細胞核染劑還是呈色劑？另外你問的脫水
05/14 06:40, 16F
→
05/14 06:41, 4年前 , 17F
封片方式兩個都有人用。我個人偏好xylene完就封片。
05/14 06:41, 17F
‣ 更多 qaz3468 的文章
文章代碼(AID): #1UapE8rO (Biotech)
‣ 更多 qaz3468 的文章
文章代碼(AID): #1UapE8rO (Biotech)