[求救] Mycoplasma 和 Black Dot 細胞汙染差異

看板Biotech作者 (帶螞蟻散步)時間6年前 (2017/08/04 14:37), 6年前編輯推噓5(5推 0噓 9→)
留言14則, 7人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
先前進行細胞株培養時 有曾經用過Hygromycin篩選細胞 之後以 Complete medium with 10% FBS and 1% P/S 培養 但最近該細胞株卻有汙染的情況發生 但症狀與Black Dot 和 Mycoplasma 汙染的情況很像 我個人判斷依據是： Black Dot : 存在於胎牛血清內之物質 高等規格級別之胎牛血清不常見 在高倍率下能以肉眼看到在細胞間有小黑點在點與點之間移動 　　　　　　而並非只是原地打轉（有可能是細胞碎片或是雜質) Mycoplasma : 症狀輕微時肉眼無法辨別 但嚴重時細胞間有黑色顆粒分佈 細胞培養液底部會有沙狀物質出現 但培養液不變色 兩者汙染嚴重時 都會影響到細胞生理現象 但若是現象輕微時 也能透過每天勤換medium 和多次DPBS清洗的步驟改善此現象 想請問兩者的依據是否是靠此判斷 ? ====== 已知目前市面上已經有販售Mycoplasma Removal Agent的產品 大概處理時間需要2週 是否處理完後 此細胞就可以進行細胞實驗 ? 至於Black Dot 由於目前似乎都是建議靠多種高濃度抗生素篩選 也有人建議說 遇到此類型汙染就直接丟掉 想請問各位有在做細胞操作的人 大多都是怎麼去處理的? 先感謝各位前輩告知 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 180.217.190.147 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1501828647.A.34B.html ※ 編輯: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 14:40:54
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08/04 14:50, , 1F
(1) mycoplasma應該無法用一般顯微鏡看到 (2) 丟掉吧
08/04 14:50, 1F
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08/04 15:07, , 2F
mycoplasma 輕微看不出來 但嚴重時培養基底部有沙狀物質
08/04 15:07, 2F
※ 編輯: a0976134 (180.217.190.147), 08/04/2017 15:47:58
推
08/04 17:36, , 3F
PCR 或是dapi染看看，這樣猜也太不科學了
08/04 17:36, 3F
推
08/04 22:50, , 4F
我們實驗室的學長姐說 他們經驗上很難清除
08/04 22:50, 4F
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08/04 22:51, , 5F
我指的是Mycoplasma 當下殺完後用KIT測是沒有了 但過陣
08/04 22:51, 5F
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08/04 22:51, , 6F
子又會出現 當然不能排除是其他地方污染 導致重複感染
08/04 22:51, 6F
推
08/06 00:58, , 7F
用過殺mycoplasma的藥但是移除後約一週又會測到 問過原廠
08/06 00:58, 7F
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08/06 00:58, , 8F
表示那是正常的 原廠建議養在low dose的藥物內或是定期清
08/06 00:58, 8F
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08/06 00:58, , 9F
除 所以後來買的到的細胞我都直接丟了 除非stable clone
08/06 00:58, 9F
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08/06 00:58, , 10F
才建議用藥定期處理 嚴重的mycoplasma汙染沙沙的比較像cel
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08/06 00:58, , 11F
l debris 至於藥處理完能不能做實驗我覺得要看實驗而定
08/06 00:58, 11F
推
08/07 12:55, , 12F
經驗談基本上這類中獎 就要丟了 沒可能殺乾淨的
08/07 12:55, 12F
推
09/05 18:43, , 13F
之後培養可試試看Invivogen的Normocin，搭配PS效果應該
09/05 18:43, 13F
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09/05 18:43, , 14F
不錯
09/05 18:43, 14F
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