[求救] SF9細胞株培養問題
爬文好像沒看到有人有這個問題
小弟最近剛培養的SF9型態上不太正常,有橢圓還有長條狀,甚至還有些特別大(確定不是
污染)
但是還是硬把它繼代下去,想說看會不會越來越健康,但是結果時好時壞
我在解凍之後分了四代,繼代兩次之後長的比較好(大小形狀較一致,圓形)
想說應該穩定了,結果再分下去型態又開始怪怪的
起初有想過培養基有問題(一個月前配製),但換了培養基之後還是一樣
想說可能那批凍的細胞比較不好,所以有解凍另外一批看看,也是一樣的情形
小弟的培養基是
grace 90%
FBS 10% (57度煮30分鐘)
PS 1%
解凍方式
取出液態氮的細胞,在27度水浴下迅速解凍至細胞尚有少許冰晶
吸出細胞至離心管,加入10ml預熱的培養基
離心,去除液體,再加入10ml預熱的培養基,將細胞沖散
再次離心,以去除抗凍劑,接著去除液體,加入10ml培養基沖散並且注入T75 flask中
放入27度培養箱中
一小時之後換新的培養基,接著20小時後再換一次,24小時再換一次,細胞就長的差不多
了
繼代方式是用手拍下來再分盤
小弟目前是懷疑溫度的影響,第一個是培養箱開門之後由於細胞培養房的溫度較低,培養
箱會降溫一點,接著為了維持設定的溫度會再升回去,只是升溫後不會剛好停在27度,會
升到28度左右再慢慢降回去,所以整個恆溫系統在開培養箱之後會暫時不太穩定
另外是細胞培養房的溫度都是在22度左右,不知道在外面操作時間稍微長一點是否會導致
培養基變冷,還有拿出來的細胞感受到的溫度也太低,只是實驗室培養的其他細胞株都養
的好好的,所以也不確定這個因素有影響
由於現在實驗室SF9只剩小弟在養了,也不知道如何是好
上網找不太到答案,有阿豆仔說如果細胞庫存夠多,不要花時間把細胞養好,解凍健康的
細胞比較好,但小弟已經試過三批細胞了,感覺情形都差不多
細胞不健康就不能繼續做下去…囧
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忘記回各位大大sorry
後來小弟有嘗試解凍細胞的步驟不要離心,但好像也是沒有長的很好
所以可能細胞本身真的就不是那麼健康
我們的Grace也是買現成的再加血清跟抗生素~
另外用沖的方式好像細胞還是抓的很緊...最後還是用拍的它們才願意下來囧
※ 編輯: s992003 (123.205.21.232), 05/26/2016 21:25:42
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