[求救] Culture medium western
大家好
我的實驗想看在culture medium (10%FBS) 裡
overexpress的 target protein 有多少被secret出來
因此目前的做法是
直接收mediumm，loading 約1/500下去做western
western壓的到我要看的protein(16~17kda) 但是極醜....
http://0rz.tw/UMKNU
由於medium中有很多BSA / IgG / lipid雜七雜八的東西
所以跑的時候會大扭曲
目前沒有考慮做elisa (因為secretion的量很多
抗體也無法做IP
因此想知道有無方法 可以處理這樣子的sample
讓western不會跑歪
目前有想到的方法是:
1.Dilute sample，取更少的量
(但因為之後要做endogenous，我怕之後此方法會不能用
2.加一些detergent進去 (?) 如SDS
查過的paper都只有寫 load medium，不太會寫怎麼處理
想問有無類似經驗的版友們可以分享經驗呢?
謝謝!
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Hela 一般 DMEM
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serum free對我來說不太可行 我的蛋白對serum敏感
有centricon這種東西阿...我來找找看
剛剛找researchgate時也有看到
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我的抗體不能IP喔 (已試過
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這樣還是沒解決land會跑歪的問題吧@@
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你是說 100%FBS 直接Loading嗎
我是有直接下過沒養過細胞的medium 就...上方歪的更可怕
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確定 我跑lysate一切正常, 只有medium會出事
也有其他實驗用過3%BSA medium, 跑出來更可怕
※ 編輯: tynse71864 (140.109.32.9), 01/10/2016 19:45:35
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討論串 (同標題文章)
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