[求救] 有關LC MS/MS的樣品製備

看板Biotech作者 (是喔)時間8年前 (2015/11/02 15:15), 編輯推噓3(305)
留言8則, 3人參與, 最新討論串1/3 (看更多)
簡單敘述一下我的實驗 實驗室研究的某個A蛋白正常為monomer形式存在 但加入了B藥物後會隨著藥物濃度增加漸漸形成dimer 而我想經由Mass知道他形成dimer是哪些胺基酸的片段或位置影響的 就我所知可以利用trypsin來做水解特定胺基酸的處理後再上機分析 我想請教的是:我們實驗室是用column純化出來的蛋白 需要跑膠處理還是直接可以用純化 後加藥的蛋白來做比較? 如果是的話蛋白濃度以及怎麼加入trypsin處理 還有trypsin的量要加多少? 小弟對於這方面一無所知 有勞各位大大救命了 感激不盡 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.243.5.233 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1446448502.A.B0F.html

11/03 19:47, , 1F
不管是monomer還是dimer,trypsin都會切
11/03 19:47, 1F

11/03 19:48, , 2F
要怎麼找binding的位置呢?請賜教!!謝謝!!
11/03 19:48, 2F

11/04 14:02, , 3F
Protein:Trypsin 1:50
11/04 14:02, 3F

11/04 14:02, , 4F
樣品在gel裡就做in-gel digest 在solution裡就做
11/04 14:02, 4F

11/04 14:03, , 5F
in-solution digest
11/04 14:03, 5F

11/04 14:03, , 6F
樣品會形成dimer一般都是雙硫鍵較多 到時候就看轉
11/04 14:03, 6F

11/04 14:05, , 7F
譯後修飾的Cys是不是有被modify過
11/04 14:05, 7F

11/09 21:49, , 8F
請問有沒有相關的paper可以參考呢?
11/09 21:49, 8F
文章代碼(AID): #1MDmrsiF (Biotech)
文章代碼(AID): #1MDmrsiF (Biotech)