Re: [求救] 免疫組織染色有雜質
※ 引述《derren (我想要ㄉ幸福M)》之銘言：
: 求救各位大大
: 實驗室用肺組織石蠟切片染色
: 一開始使用DAB染色以為有染上，
: 但因型態實心是很奇怪(長得有點像圓盤狀紅血球)
: http://imgur.com/0PDO7oP
: 我們想要染肺細胞的水通道蛋白，
: 理論上應該在細胞膜上並空心圍繞著核，
: 所以後來又使用了螢光染色，
: 發現有很多黃色雜質，而且都沒有跟DAPI merge在一起
: http://imgur.com/IF2i3oT
: 在高倍下螢光強度加強才看到有綠色螢光細胞
: http://imgur.com/7RM7YOA
: 想請問各位如何減少雜質，
: 目前我所推測到的是我們未使用灌流所以雜質都是紅血球(無核)?
: 不知道是否是這個原因造成的?
: 謝謝各位大大
不知道您使用的peroxidase blocking用多少濃度的H2O2 且blocking多久
通常這和peroxidase blocking的步驟有關係
你可以嘗試稍微提高H2O2濃度 或是用原來的濃度blocking兩次
試試看 之前我們也有一些case會這樣
後來是以增加blocking次數來排除這個情況
這些是因為DAB和RBC裡面的peroxidase作用呈色的
如果組織內有血漿的話也會這樣
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