[閒聊] Genome editing - CRISPR/Cas9

看板Biotech作者silverberry (平行線上的交集....)時間9年前 (2015/01/23 13:47)推噓1(1推 0噓 9→)

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大家好，標題用閒聊是想聽聽大家的意見。如果不合適的話請告訴我，我會修改 m(_ _)m 我的實驗室最近想要開始使用 CRISPRC/Cas9，除了從 addgene 買了相對應的 vector，為了快速地確認這個技術在實驗室是成功的，我們決定先把有 stable eGFP transfect 的細胞裡的 eGFP 做 deletion。根據 gRNA 設計的原理，最後挑了四個 gRNA gRNA1 gRNA2 5'-nnnnnnnnnn 我是 eGFP nnnnnnnnnnn-3' 3'-nnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn-5' gRNA3 gRNA4 gRNA1,2 是根據 (+) strain 設計的 gRNA3,4 是根據 (-) strain 設計的為了確定可以把 eGFP 去掉，除了一定要的 Cas9 以外，打算做 gRNA1+gRNA2 gRNA1+gRNA4 gRNA3+gRNA2 gRNA3+gRNA4 四組 co-transfection 然後再看看哪一組都不亮了、並配合 FACS 跟 genomic DNA PCR 確定真的成功了。設計這四組 co-transfection，合理嗎? 還是我們想太多了? 雖然很可能試了才知道怎麼會成功，不知道有沒有人可以分享一些經驗^^ 謝謝 m(_ _)m -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 73.164.8.164 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1421992061.A.AFA.html

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williamyang

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