Re: [求救] HPLC分離後的胜肽，合成回來後RT改變

看板Biotech作者proky (proky)時間10年前 (2014/03/16 01:11)推噓2(2推 0噓 1→)

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※ 引述《hsuan7919 (阿頭)》之銘言： : 小弟最近以HPLC將一個發酵產物分離出許多不同分子量的fraction : column:TSK G2000swxl (size exclusion chromatography) : mobile phase:KH2PO4 100 mM + 1M NaCl + 1mM EDTA : detector:UV : 之後將這些fraction拿去以LC-MS/MS鑑定各根fraction中可能存在的序列 : 再分析各根fraction中哪段序列的可信分數為最高 : 將這段選定序列，送去外面生技公司做胜肽合成 : 合成回來的peptide我拿去再以同樣條件HPLC打一次 : 發現此peptide的RT，和我一開始以HPLC分離下來的fraction的RT不同(差很遠) : 有想過是不是溶解度的問題 : 後來我也依照peptide性質以適合的有機溶劑溶解 : 但跑出來結果，和以水溶解沒有差別== : 就分子篩column來說，就算某根fraction內可能的氨基酸序列有數條 : 那RT差一點點或許可以接受 : 但RT差有點多....我真的想不出是什麼原因造成的.... : 而且合成胜肽的peak的RT range也有點寬...不像是正常peak... : 附圖在此https://www.dropbox.com/s/idn79zmeiuw6ro6/%E5%9C%96%E7%89%871.jpg

: 再麻煩各位有經驗的大大幫我解惑了!!!感恩~~ 一般peptide純度會用Reverse phase C18 HPLC 鑑別,建議把原始收的peak與和成的以RP HPLC分析一次，對照RT就可以確定差別 -- Sent from my Android -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.240.3.160

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dehydrogenas

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hsuan7919

05/13 22:50, , 2^F

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06/23 15:26, , 3^F

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