[求救] Real-time PCR NTC訊號時有時無

看板Biotech作者churchfire (別小看我...)時間10年前 (2014/01/09 16:20)推噓2(2推 0噓 9→)

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小弟使用Roter gene 6000的real-time PCR machine. Master-Mix為Bioline NO-ROX SYBR-Green Total Reaction volum為20ul 檢體為plant Genomic DNA 問題是:我時常NTC(no-template control, 我用滅菌的無菌水)會有singal Ct值直逼20-35左右~~~ 我的primer量也下很少，各約100nM 至於是否有primer dimer，我是使用網路上的軟體設計的，我想應該沒有dimer的情形我也將product去跑電泳切膠，amplicaon size 大約100bp，這個確定就不是primer dimer了!! 我也加上melting curve，產物專一性很高，和我其他有加template的相當有時會有出現，一般第一次打開的無菌水(或是廠商的水)都不會有singal 但第二次用的時候就有了，或是到第三次出現!@@ 也分裝處理(一次用完就把那罐水丟掉)，竟然也是如此!! 請問大家有遇過這樣的狀況嗎?? PS:我們實驗室是電泳、Bench、machine都擺在同一大間實驗室的那種!! 會不會是air contamination? 感謝!! 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出以方便板友幫您追蹤問題若是求救事項涉及實驗室智慧財產(例如細胞細菌植株、質體載體等）之分讓，請務必註明貴實驗室願意設立正式合作或簽署材料分讓協議(MTA)，否則版工將逕行刪除 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.69.175.253

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puec2

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churchfire

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churchfire

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