[求救] MboII 限制酶切CYP1A2*2 SNP
各位科學家大家好
我們班上實驗課最近在測班上同學的CYP1A2是否有SNP "CYP1A2*2"(63C>G)
做PCR夾出含有SNP片段之後 用MboII切
查到MboII切 5'GAAGANNNNNNNN 3'
^
3'CTTCTNNNNNNN 5'
想請問
1) 那些N是什麼意思 我以為限制酶要找對的序列切 要很精準? N不管是啥都會切囉?
2) 我們要找的SNP是C>G, 但63是從哪裡算起，畢竟我們primer夾出201base pair
如果有突變成G 會切成122+79
跑膠之後 發現大家都是G/G (homozygous突變!!) 各文獻顯示63C>G很罕見啊
怎會全班都突變哩
是不是我有誤解哪部分的資訊
我有想把primer序列打到NCBI去看夾出來的片段 但是我還是不知道63是從哪裡算起
這片段裡也有可能有很多C
1-不確定human CYP1A2 accession number
2-我貼了整段CYP1A2序列(NCBI跟Primer3) 但我們用的primer卻夾不到片段???
(後來primer3夾到了...但是不知道怎麼使用來檢查班上的突變?)
3-其實我們同時有夾另一段有SNP CYP1A2*1F (-164A>C) 負的位置是指promoter嗎
我是不是要去找exon intron structure有幫助呢?
還要請大家幫我找我查資料的方式錯在哪
謝謝你們
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