[求救] SDS-PAGE 跑膠圖求助

看板Biotech作者 (ED)時間10年前 (2013/10/29 02:47), 編輯推噓7(7推 0噓 36→)
留言43則, 18人參與, 最新討論串1/2 (看更多)
請問我2小時跑出來的電泳膠，怎麼好像跑不動!! 跑了好幾片都長這樣!!@@ 設定100V http://ppt.cc/XvXl 是哪邊出了問題，有人知道嗎??求解ORZ 補上running buffer配方 10X electrophoresis running buffer: In a final volume of 500mL of ddH2O, dissolve 15g of Tris-base, 72g of glycine and 5g of SDS 先配10倍的，使用前稀釋成1倍!! 有蓋到WELL以上，沒有漏!!我看機器顯示是100V我設定也是100V -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.195.15.103
推
10/29 09:00, , 1F
設定100V跟是否到達100V是兩回事，你是哪一個？
10/29 09:00, 1F
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10/29 10:09, , 2F
buffer對不對，有沒有蓋到well以上（有沒有漏）
10/29 10:09, 2F
推
10/29 10:09, , 3F
你的running buffer 有check嗎? 是自己配的嗎?
10/29 10:09, 3F
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10/29 10:24, , 4F
buffer漏了?
10/29 10:24, 4F
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10/29 10:47, , 5F
有stacking gel嗎
10/29 10:47, 5F
推
10/29 11:06, , 6F
他已經把stack剷掉了吧 上次有這情況搞半天結果是
10/29 11:06, 6F
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10/29 11:07, , 7F
蓋子上的銅接頭生鏽嚴重 能通過的電剩一點點
10/29 11:07, 7F
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10/29 11:07, , 8F
如果buffer都沒問題 也沒漏buffer 就檢查PSU,接頭,
10/29 11:07, 8F
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10/29 11:08, , 9F
還有那條貴森森鉑金線
10/29 11:08, 9F
※ 編輯: EDONIS 來自: 123.195.15.103 (10/29 16:19)
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10/29 17:23, , 10F
tris才15g?
10/29 17:23, 10F
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10/29 21:19, , 11F
Tris是正常的,但你不該調pH,如果覺得跟往常有不尋常的發熱
10/29 21:19, 11F
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10/29 22:33, , 12F
我沒有調PH值!!我直接用了!!
10/29 22:33, 12F
※ 編輯: EDONIS 來自: 123.195.15.103 (10/29 22:33)
推
10/30 00:43, , 13F
是biorad就是是看~把內外buf都灌到一樣高跑跑看
10/30 00:43, 13F
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10/30 00:48, , 14F
很反對上面做法，錯誤的情況不該也不可再用錯誤方法解決
10/30 00:48, 14F
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10/30 03:18, , 15F
buffer加到一樣高根本沒有幫助
10/30 03:18, 15F
推
10/31 03:04, , 16F
看這張圖的感覺很像是全部卡在Stacking gel 無法過去
10/31 03:04, 16F
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10/31 03:06, , 17F
separating gel 那邊, 當初配SDS-PAGE的buffer PH值要
10/31 03:06, 17F
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10/31 03:07, , 18F
不要再確認一下 ?
10/31 03:07, 18F
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10/31 03:08, , 19F
還有就是 當初sample dye裡面有加beta-Me或者DTT嗎?
10/31 03:08, 19F
推
10/31 04:14, , 20F
我猜也是separating有問題 沒配錯的話check一下pH值.
10/31 04:14, 20F
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10/31 14:50, , 21F
可能是白金絲斷了
10/31 14:50, 21F
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10/31 23:23, , 22F
下膠PH錯了
10/31 23:23, 22F
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11/01 02:01, , 23F
下層除了1.5M Tris-HCl (pH8.8)其他都沒調PH值!!
11/01 02:01, 23F
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11/01 02:03, , 24F
下層膠的配方我發文問過@@~~也曾懷疑過又重新查配方試了
11/01 02:03, 24F
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11/01 02:03, , 25F
跑出來也這樣!!@@sample dye我買配好的!!裡面都加了!!
11/01 02:03, 25F
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11/01 02:04, , 26F
板大有成功過的配方可以來信我在重新做一次確認下嗎??
11/01 02:04, 26F
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11/01 02:34, , 27F
你是不是在重配Tris-HCl pH8.8或6.8之後就這樣了？
11/01 02:34, 27F
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11/01 02:36, , 28F
以及你好像沒有回應你的sample到底在stacking或separating?
11/01 02:36, 28F
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11/01 16:20, , 29F
應該是跑過了stacking然後separating這裡好像卡住!!
11/01 16:20, 29F
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11/01 23:43, , 30F
通常上下膠的PH值我都是調final的PH值 不會只調Tris的
11/01 23:43, 30F
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11/01 23:44, , 31F
部分 以這張跑膠塗看起來比較像是Seperating gel那邊
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11/01 23:45, , 32F
出了問題 最有可能就是你下膠沒配好(我以前也發生過類
11/01 23:45, 32F
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11/01 23:46, , 33F
似這張圖的情況 再不然還有一點就是 你蛋白萃取的時候
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11/01 23:47, , 34F
沒有處理好可能還留下大片段的DNA SAMPLE DYE裡面是否
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11/01 23:47, , 35F
有還原劑也會影響Protein denature程度 但以你這張圖來
11/01 23:47, 35F
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11/01 23:48, , 36F
看 感覺比較像是你膠沒做好 下次配再15ML/50ML tube裡
11/01 23:48, 36F
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11/01 23:49, , 37F
請記得要混和均勻 不然會影響他跑膠得過程
11/01 23:49, 37F
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11/01 23:49, , 38F
以上是一些意見 僅供E大參考囉^^
11/01 23:49, 38F
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11/02 01:00, , 39F
電源供應器是否誤設時間?
11/02 01:00, 39F
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11/02 18:23, , 40F
對了 電源顯示100V 那電流呢?
11/02 18:23, 40F
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11/04 13:47, , 41F
你的膠是做幾%的？？
11/04 13:47, 41F
推
11/06 02:06, , 42F
buffer有過白金絲嗎?
11/06 02:06, 42F
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11/09 20:46, , 43F
有過白金絲，是12%的膠!!我2小時時間到去停的!!
11/09 20:46, 43F
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文章代碼(AID): #1IRh4zPg (Biotech)
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