Re: {求救}小鼠組織石蠟切片IHC

看板Biotech作者chaichi (chaichi)時間10年前 (2013/10/21 02:32)推噓6(6推 0噓 8→)

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※ 引述《caesar0926 (嗚哈哈)》之銘言： : ※ 引述《chaichi (chaichi)》之銘言： : : 我是在做小鼠眼睛的石蠟切片染色,用IHC來染色,使用ABC法, : : 用脫蠟.vector的ABC之後再用DAB呈色再用hemoxylin染核,但是我染了很多次都沒染出訊號 : : control(沒加一抗)和有加抗體的有顏色深淺差異 : : 但從有加抗體那片我無法判斷出哪裡是有訊號的 : : 一片咖啡色,沒有一點一點的深咖啡色訊號 : : 我在做DAB呈色時,有在顯微鏡下觀察,且成色時間不長,所以應該不會背景太深 : : 而我染的組織前面的學長有做過同樣天數眼睛的IHC有染出訊號過 : : 可以確定此組織可以染出訊號 : : 我想問這樣我該怎麼辦才能染出訊號? : : 還有我想問取下組織後泡福瑪鈴的時間長短會有影響嗎? : : 因為一直做不出來實在好困擾 : : 希望有人可以告訴我謝謝 : 以前也做小鼠眼球染色(螢光和DAB呈色) : 我覺得臘切眼球比較容易遇到的問題是切片常常破片(lens的原因) : 但你好像沒這方面問題 : 但是有幾個問題 : 1.你要看到位置是眼球哪個位置?角膜?視網膜?還是..? : 2.你染的是什麼蛋白?正常表現狀況?表現位置? : 3.脫臘的過程也會影響你的呈色?有antigen retrieval嗎?是用什麼方式? : 你只用了兩個字帶過。(常常染不上去、背景值高可以改善這步驟) : 4.抗體稀釋比例也會影響背景值，也沒有提供相關資訊 : 5.你用什麼固定?福馬林是formaldehyde 還是 paraformaldehyde? : 很努力看才看懂你文章 =_= 很抱歉細節部分打的不清楚我切片出來的結果眼睛的水晶體視網膜都很完整要染的蛋白質出現的地方是在視網膜以及眼外肌我是做三天小鼠的眼睛切片是整顆頭去做石蠟包埋切片脫蠟的過程是xylenen三次, 酒精100% 95 % 75% 50% 30%進行覆水 d2dH2O 使用citrate acid隔水加熱進行抗原修復,再用H2O2,然後blokcking用1%BSA 抗體比例我試過一抗1000倍.500倍.200倍二抗800倍都沒有訊號我是用formaldehyde加上EDTA來固定 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.46.217.160

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tchan

10/21 11:38, , 1^F

10/21 11:38, 1^F

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Dauthi

10/21 18:23, , 2^F

10/21 18:23, 2^F

→

vandia

10/21 21:13, , 3^F

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