Re: [請益] primary culture用的DNaseI
※ 引述《martyrtitan (Martyrs)》之銘言：
: ※ 引述《LIAR (玻璃做的大叔)》之銘言：
: : 我用sigma D4527，應該有更便宜的。
: : 我覺得經驗比你算半天還有用，如果過程沒有傷到太多，我有遇過不加都可以過40um，
: : 但有時太暴力，就算加兩倍還有鼻涕XD
: : 另外就是保存的問題，來回解凍或是配太久效力會下降，我第一次買新的用，
: : 其效果之強令人驚豔，就算把量降到50%，都能在一分鐘內把鼻涕給弄不見。
: : 另外一個小插曲：D4527有說要二價離子輔助，但有一次我白目拿到有EDTA-trypsin
: : 去處理tissue，不用說，鼻涕一下就堵住篩網了，就算我DNase加到兩倍量都沒用。
: 很久之前的文章
: 但最近遇到一些初代細胞問題
: 想請教各位前輩..
: 1. sigma的DNase I: DN25(我用的) 和 D4527 應該都是需要二價離子輔助吧?
: 那理論上就如同前文所說的Trypsin不能含有EDTA在裡面
: 但我看的 Cuturling Hippocampal Cell (nature protocol)
: 裡面還是使用Trypsin/EDTA....
: 雖然中間經過2-3次HBSS清洗，是否還會影響呢?
: 我的方式是Trypsin incubate 15分鐘後抽掉 加入HBSS清洗2-3次再加入DNaseI
: 但還是有些鼻涕...
: 2. 和其他家老師學的時候 他們用9% O2養，有人用這環境養過嗎?
: 另外，想再問抗生素(Gibco:15240-062)會不會影響初代神經細胞生長
: 我用的是1%，因為我學的時候是AA-free
: 感謝大家，也歡迎一起討論難搞的初代神經...
我也有養過primary neuron
到業界一陣子了 但大部分都還記得
自認我養neuron養的還不差 而我從沒用過DNaseI
在trypsinzation那一步時 輕輕地搖晃 絕對不能用pipeting
理論上就不會傷害細胞 genomic DNA也就不會跑出來
這是我的小小經驗嚕
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單身不代表寂寞，寂寞是走在一個不愛妳的人身邊的時候。
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