Re: [討論] 做IHC所使用的sample

看板Biotech作者Dauthi (斬不斷的思緒)時間10年前 (2013/09/25 16:14)推噓6(6推 0噓 26→)

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※ 引述《KTXNS (Yeah!大佛!)》之銘言： : 問題是這樣 3個多月前我做了一批Tg mice肝臟石蠟切片 : 做IHC染色(B肝病毒蛋白) 結果很明顯是Positive : 但是背景有點太深(偏紅)一直想重染但一直到最近才有空 : 和另外一批剛切的片子一起染結果剛切的染出positive了 : 之前切的卻沒染出來試了兩次都一樣 : 我懷疑可能要重切但有學長覺得應該不是這問題... : 不過具體有什麼問題他也說不上...只叫我再試~ : (不過大家知道的...抗體不便宜阿雖然我會recycle...) : ========= : 想請教會做IHC的各位 : 切片到染IHC最長會擺多久會到3個月嗎? : 謝謝! 做過不少IHC依經驗回答一下 1.最近這次染的抗體是重新配置的還是拿上次稀釋好的重用？這關係到抗體活性事隔這麼久如果是以稀釋好的抗體可能早就沒活性 2.切片放置時間這我沒辦法回答很正確的答案這也關係到抗原蛋白的問題但在自己以前的經驗上覺得已經被福馬林固定過的的蛋白要再變性的機會很低通常我們在做實驗要染色的切片如果要染的數量很大的話都會建議一次把整個蠟塊切完因為每次重切(如你說的會在蠟塊上封一層蠟) 都要再多削掉幾塊這樣能染的組織片數就會減少(有些組織得來不易阿) 也這樣放過好幾個月甚至幾年都還可以染的到陽性另外以前待的實驗室也有人做過放了十幾二十年的蠟塊(病毒性疾病) 再拿出來切片染IHC還是可以偵測的到病源所以切片放置時間理論上應該不會受到影響 3.抗體recycle 我本身是沒有試過抗體recycle之後再繼續染色的經驗所以關於這點想知道的是當初您有用recycle過的抗體再染一次新的切片嗎？本身沒做過所以比較懷疑recycle之後的抗體效力這點有待確認至於蠟塊切完上面會封一層蠟詳細情形我也忘了是為什麼了印象中是怕保存時因為疏失直接傷害到組織所以再給他一層保護 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.98.120

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